第二節　ABO血型系統

ABO血型系統是人類發現的第一個血型系統，也是臨床上最重要的血型系統之一。ABO血型不相容的輸血會發生嚴重的輸血反應，甚至導致患者死亡。ABO血型抗原不僅只存在于紅細胞表面，而且還廣泛存在于消化道、皮膚上皮細胞、呼吸道、泌尿系統以及人的體液中，包括唾液、眼淚、尿液、消化液、膽汁、乳液、羊水、體腔液及卵巢囊腫液中。

一、ABO血型抗原與抗體的特性

ABO血型系統是卡爾·蘭德斯坦那(Karl Landsteiner)在1900年發現的。基于他所假設的兩種紅細胞抗原A和B，蘭德斯坦那發現，根據每個人紅細胞上是否存在A和B抗原，可將人分成四種血型。同時，蘭德斯坦那又發現若一個個體的紅細胞上缺乏A抗原，則其血清中通常會有抗A抗體。若一個個體的紅細胞上缺乏B抗原，則其血清中通常會有抗B抗體。

ABO血型分類原則如下：紅細胞上有A抗原、血清中有抗B者稱為A型；紅細胞上有B抗原、血清中有抗A者稱為B型；紅細胞上有A和B抗原、血清中無抗A和抗B者稱為AB型；紅細胞上無A和B抗原、血清中有抗A和抗B者稱為O型。

二、ABO血型表現的頻率

由于鑒定ABO血型比較容易，在世界范圍內已積累了不下幾十萬中國人ABO血型的資料。表2-3是中國各地區ABO血型的分布。從表2-4可見A、B、O血型在中國分布特點為：從北向西南的方向，B基因頻率逐漸下降而O基因頻率升高；云南、貴州、四川和長江中下游地區，A基因頻率升高，廣東、廣西、福建、臺灣O基因頻率較其他地區高。

三、ABO血型的遺傳與生化合成

ABO血型遺傳是常染色體顯性遺傳。根據遺傳學原理，每個子代均可從親代各得到一個單倍體，因此根據父母的血型可以推斷子女的血型(表2-5)。

現在很少用ABO血型進行親子關系鑒定，當用ABO血型判定遺傳關系時，應注意特殊情況，例如極罕見的順式AB型。需要對家族血型進行分析及應用分子生物學技術，才能得出正確結論。

ABO血型抗原的化學結構屬于糖蛋白，它們的構成主要涉及兩個分離座位的基因； H座位基因和ABO座位的基因，這些基因不直接產生抗原，而是產生糖基轉移酶，糖基轉移酶決定了ABO血型抗原的特異性。因此糖基轉移酶是基因的直接產物，而血型抗原決定簇的單糖或寡糖是基因的間接產物，目前已了解大約有100個糖基轉移酶涉及ABO血型抗原及它們的變異型的構成。

ABO血型的抗原決定簇是連接在血型物質的多聚糖前體或稱為載體鏈上。血型物質的前體是多糖結構，人類已發現了5個型的血型多聚糖前體，在構成血型抗原的結構上，以Ⅱ型鏈為主，Ⅲ或Ⅳ型鏈只少量存在，Ⅴ型鏈罕見，Ⅰ型鏈不屬于細胞內源性物質而是由血漿吸附而來。血型多聚糖前體的基本結構是最后三個糖，分別是半乳糖-乙酰葡萄糖胺-半乳糖。

ABO血型的抗原決定簇是低聚糖鏈的結構，它們的產生是由一個連續的兩個步驟組成。第一步是由一位于第19號染色體上的H基因控制，H基因負責編碼巖藻糖轉移酶，這個酶能識別血型多聚糖前體的終端半乳糖，并將巖藻糖添加到半乳糖上，形成了特異性的H抗原。H抗原在O細胞上表達重組為A、B抗原的前體。第二步是由位于第9號染色體的ABO基因座位控制。負責編碼A或B等轉移酶，完成A和B抗原的構建。A抗原是通過ABO基因座位上的A基因，編碼N-乙酰半乳糖胺糖基轉移酶(簡稱A酶，下同)，A酶把H抗原作為底物，催化反應，將N-乙酰半乳糖胺(N-acetylgalactosamine，GalNAC)加接到終端的半乳糖上，構成A抗原。A酶只能在H抗原存在的情況下表現其催化活性。

B抗原是通過ABO基因座位中的B基因，編碼半乳糖糖基轉移酶(簡稱B酶，下同)催化反應，將終端半乳糖以α(1→3)的方式，加接到H抗原的終端半乳糖上，構建成為B抗原。同樣B酶也只能在H抗原的存在下，表現其酶的活性。

四、ABO亞型

ABO血型有數種亞型，A和B亞型紅細胞與A和B型紅細胞主要區別不僅表現在細胞膜上抗原決定簇數量上，也表現在抗原性質上，這些細胞與標準抗A、抗B血清反應較弱，有時肉眼幾乎看不到凝集。在鑒定亞型時，除用抗A、抗B血清之外，還沒有發現相應的特異性血清。因此，實際上是根據受檢者紅細胞抗原的強弱、血清中抗體的性質及唾液中分泌型物質的性質及多少來確定亞型的。

A亞型有A1、A2、A3、Ax、Aint、Abantu、Ael、Am、Ay、A(B)等。特點：與抗-A血清凝集弱、混合外觀，甚至不凝集。

A1亞型：紅細胞膜上含有A抗原和A、抗原，血清中只含抗-B抗體，A1亞型和A1B亞型約占A亞型的80%。

A2亞型：只含有A抗原，血清中除了含抗-B抗體外，還含有抗-A、抗體，有1%～8%A2亞型血清中含有抗-A、抗體，能夠凝集A1型及A1B型紅細胞。A2亞型和A2B亞型約占全體A亞型的20%。A1亞型紅細胞凝集力＞A2亞型紅細胞凝集力。

A3亞型：A3紅細胞與抗-A和抗-AB血清反應呈典型的混合視野凝集現象。

Ax亞型：Ax紅細胞不與抗-A反應，只與O型人抗-A1B反應，Ax可以和一些單克隆抗體反應。

Ael亞型：Ael紅細胞不與抗-A和抗-AB反應，用吸收放散試驗能證實其紅細胞上有A抗原。

Aint亞型：Aint與抗-A1反應比A1較弱，與H反應強度較強。

總之，除A1及A2亞型外，其余的A亞型與高效價抗-A或O型血清只能發生在顯微鏡下可見的微弱凝集，甚至不凝集，需用吸收放散試驗檢測紅細胞表面的A抗原，或用吸收抑制試驗證明唾液中A型物質存在才能鑒別。

B亞型有B2、Bx、Bm、Bel、B5、B(A)等。特點：與抗-B血清凝集弱，混合外觀，甚至不凝集。

AB亞型：由于有A和B亞型存在，故有AB亞型存在。AB亞型中有些有不規則抗體，22%～35%的A2B亞型血清中含有抗-A1抗體，它能凝集A1型及A1B型的紅細胞。

O亞型(Oh型)：在孟買人中發現有一種紅細胞膜上沒有H抗原的O型(又叫孟買血型)，其紅細胞不被抗-A及抗-B和抗-H血清凝集，其血清中含有抗-A及抗-B和強烈的抗-H抗體，該型的血清能凝集所有O型的紅細胞，此型患者只能輸O亞型同型血。

1．A1、A2亞型鑒定

利用抗A1血清與A1型紅細胞發生凝集，而不與A2型紅細胞凝集的特性，可區分為A1型與A2型。

(1)材料

① 抗A1標準血清。

② 受檢者2%紅細胞懸液。

③ 標準A1和A2型2%紅細胞懸液，作對照用。

(2)操作

① 取玻片1張，兩端標記A1和A2。

② 兩端均加抗A1血清各1滴。

③ A1端加2%A1紅細胞懸液1滴。

④ A2端加2%A2紅細胞懸液1滴。

⑤ 另取1張玻片，加抗A1血清1滴，再加2%受檢者紅細胞懸液1滴。

⑥ 用玻棒或牙簽將上述滴加物混勻，室溫下10min觀察結果。

(3)結果判斷　如A1型對照紅細胞凝集，A2型對照紅細胞不凝集，受檢者紅細胞凝集，判為A1亞型，受檢者紅細胞不凝集，則為A2亞型。

新生兒ABO抗原較弱，不宜做亞型鑒定。

2．A3、A4、Am、Ax、A3B、A4B、B3、Am、Bx等亞型鑒定

對于這類亞型的鑒定，除了做常規ABO血型鑒定外，還要測定其唾液中血型物質和應用吸收放散試驗等方法綜合鑒定A、B亞型(表2-6)。

五、對ABO血型不一致的解決辦法

血型鑒定結果不一致的原因有兩類：一類為技術方面的原因，是最主要的原因；另一類是責任方面的原因。

1．技術方面的原因

可以出現假陰性及假陽性結果。

(1)假陰性結果　應發生凝集現象而未出現者。

① 標準血清效價太弱，為標準血清運輸及保存不當可能所致。

解決辦法：在運輸、使用過程中，盛放試劑的容器內的溫度要保持在2～8℃，在保存期內注意定期測定標準血清效價；不使用超過保存期的標準血清，堅持正向、反向定型。

② 紅細胞懸液過濃或過淡，使抗原抗體比例失調而反應不明顯。

解決辦法：IgM抗體選用2%紅細胞懸液，IgG抗體使用5%紅細胞懸液。

③ 標準血清與紅細胞懸液比例不當，使反應不明顯。

解決辦法：采用1∶1的比例，嚴格按照各試劑說明書的要求做。

④ 被檢紅細胞敏感性過低，多見于新生兒、老年人或某些疾病致紅細胞抗原減弱者，或放置太久。

解決辦法：所用標本不超過3d，做正向、反向定型。

⑤ 反應時間不足，未按規定時間判斷結果，并報告，多見于玻片法。

解決辦法：應在10～30min后報告結果。

⑥ 溫度不適，如溫度過高血細胞受損可產生假陰性。

解決辦法：實驗室溫度要保持在20℃左右。

⑦ 紅細胞凝集較細小，觀察不細心，誤認為未凝集。

解決辦法：應堅持用顯微鏡觀察。

⑧ 補體存在而溶血。

解決辦法：實驗前后對照觀察，發現溶血，滅活補體再做。

⑨ IgG抗體遮斷致未凝集。

解決辦法：應做釋放試驗后再做。

(2)假陽性反應

① 紅細胞錢串狀凝集：紅細胞相連成串，而非真正的凝集。常見于血清濃縮，血纖維蛋白原或球蛋白增高，實驗時間過長，溫度過低或輸入大量高分子物質。

解決方法：使用合格血清，將受檢者紅細胞用0.9%氯化鈉注射液洗滌3次，再滴加1～3滴生理鹽水，混勻，錢串狀凝集即可散開。

② 寒冷凝集：見于正常人血清中含有寒冷凝集素，且效價過強，未被充分吸收所致。

解決辦法：用37～45℃的生理鹽水洗紅細胞，并在37℃水浴箱內進行實驗。多見于病毒性肺炎、溶血性貧血、陣發性冷性血紅蛋白尿癥及肝硬化等。

③ T凝集：患者感染或細菌污染紅細胞能與任何人的血清發生凝集，此種紅細胞也稱全凝集紅細胞。

解決辦法：用AB型血清與患者紅細胞做凝集試驗，證實有凝集；用標準紅細胞檢測血清抗體，用患者的紅細胞做吸收釋放試驗，或取唾液做吸收抑制試驗。

④ H凝集：因細菌污染血清而產生的H抗體，與紅細胞的H抗原反應產生凝集。

解決辦法：試驗所用血清避免細菌污染，定期檢測血清的特異性。

⑤ 繼發血液凝固：可發生于未經洗滌的紅細胞懸液和新鮮血清。

解決辦法：將實驗用的紅細胞洗滌，應用符合要求的標準血清。

⑥ 玻片法所致：反應時間過長，檢驗者責任心不強，觀察結果不及時，放置時間過久，血清濃縮，細胞聚集均可造成假陽性。

解決辦法：加強責任心，嚴格操作規程。

⑦ 其他：臍帶華通膠、自身免疫抗體、藥物性抗體(青霉素、磺胺類等)等均可出現假凝集現象，試驗當中應引起重視。

2．責任方面的原因

① 標本采錯，張冠李戴。

② 大批量鑒定時，標簽貼錯，編號編錯。

③ 少量標本，僅憑記憶，不做標記。

④ 所有試劑前后滴加次序搞亂或漏加、重加。

⑤ 使用不合格試劑。

⑥ 未認真觀察結果，填錯報告。

以上幾項有一項做不到位，均可出現錯誤結果。輸血前的血型鑒定是事關安全輸血的首要檢查。為此，檢驗人員必須樹立全心全意為患者服務的思想；以高度的責任心、嚴謹的工作態度，做好各項工作，嚴格執行各項操作規程；在任何情況下，都要細心謹慎，思想高度集中，要養成忙而不亂的工作習慣，以科學的工作作風完成每個實驗步驟，為患者安全輸血打下牢固的基礎。