臨床上反復應用血制品且對血制品治療無效的血友病A/B患者，需高度懷疑是否出現FⅧ/FⅨ抑制物，并用Bethesda法或改良Bethesda法（Nijmegen法）進行測定。

Bethesda法是國際上首個被廣泛接受和推薦的用于測定凝血因子抑制物的方法，最早應用于1975年。其理論基礎是FⅧ/FⅨ抑制物能夠抑制正常血漿的FⅧ/FⅨ。它以等量的病例血漿與正常混合血漿混勻作為測試血漿，另以等量正常混合血漿與pH7.4的咪唑緩沖液混勻作為對照血漿，置于37℃水浴2小時后檢測殘余FⅧ：C/FⅨ：C活性，以測試血漿中的殘余FⅧ：C/FⅨ：C活性相對對照血漿下降50%為一個Bethesda單位（BU），計算出抑制物的滴度。

結果判定：殘余FⅧ：C/FⅨ：C下降50%為1.0BU，閾值設定為殘余FⅧ：C/FⅨ：C66%（即0.6BU）；殘余FⅧ：C/FⅨ：C80%為陰性；殘余FⅧ：C/FⅨ：C 66%～80%報告為＜0.6BU；殘余FⅧ：C/FⅨ：C≤30%樣本需要稀釋后重新測定。根據抑制物滴度水平進行分型：高滴度抑制物者指患者血漿FⅧ/FⅨ抑制物滴度≥5BU；低滴度抑制物者指抑制物滴度＜5BU。

該方法簡便經濟，易于推廣，但仍存在不少問題，其對FⅧ/FⅨ抑制物檢測缺乏特異性，尤其是當抑制物水平較低時。其原因是標準Bethesda方法采用的正常混合血漿缺乏緩沖體系，導致在孵育過程中混合血漿中pH升高，FⅧ濃度自然下降，影響抑制物檢測的敏感性、特異性和穩定性。另外由于對照血漿是以咪唑緩沖液與正常血漿相混合，而測試血漿中是病例血漿，而血液凝固是一個復雜的過程，涉及多種凝血因子及其他因子，測試血漿與對照血漿中的凝血因子含量明顯不同，導致測得的抑制物滴度值誤差加大。

改良Bethesda法（Nijmegen法）對Bethesda法進行了改進，用乏FⅧ/FⅨ血漿代替咪唑緩沖液，同時向正常混合血漿中加入緩沖體系。具體方法是等量Nijmegen正常混合血漿與等量乏FⅧ/FⅨ血漿混合作為標準血漿，等量病例血漿與等量Nijmegen正常混合血漿混合作為待測血漿。將標準血漿與待測血漿置于37℃水浴2小時，以不同稀釋度的標準血漿做FⅧ：C/FⅨ：C的標準曲線，以此檢測待測血漿中殘留的FⅧ：C/FⅨ：C。根據待測血漿中殘留的FⅧ：C/FⅨ：C與BU的關系，計算FⅧ/FⅨ抑制物的量。

Nijmegen法對于檢驗低滴度抗體特異性較好，目前已成為國際上推薦的檢測FⅧ/FⅨ抑制物的標準方法。但該方法仍存在抑制物檢測準確性較低和抑制物陽性標準不統一兩個主要問題。

為克服上述問題，有研究嘗試通過產色物質測定的方法進行抑制物的檢測，小樣本的研究表明該方法更有利于低滴度抑制物的檢出，但目前尚無大樣本的臨床應用結果。另外，也有許多研究通過ELISA方法對抑制物進行檢測，ELISA方法可以直接檢測抑制物，敏感性高，但特異性較低，不能辨別無抑制活性的抗體，尚無法標準化和大規模商業化生產，應用范圍較小。