測定血漿FⅧ活性（FⅧ：C），輔以FⅧ抗原（FⅧ：Ag）可確診血友病A；測定血漿FⅨ活性（FⅨ：C），輔以FⅨ抗原（FⅨ：Ag）可確診血友病B。以上檢測也可鑒別血友病A和B。若患者的FⅧ：C/FⅨ：C和FⅧ：Ag/FⅨ：Ag同時相應減低，提示FⅧ/FⅨ蛋白質合成和分泌減少；若其FⅧ：C/FⅨ：C減低而FⅧ：Ag/FⅨ：Ag正常，則提示FⅧ/FⅨ相應的分子功能異常。

FⅧ：C/FⅨ：C目前多采用一期法測定。一期法的前提條件是假定反應系統中只有FⅧ/FⅨ是可變的，其他血漿凝血因子均恒定且正常，在這一系統中凝血時間只與FⅧ：C/FⅨ：C水平有關。

本法用人凝血因子FⅧ/FⅨ缺乏血漿為基質血漿，符合血漿FⅧ/FⅨ國際標準的血漿作為原始標準血漿，而在臨床測定中更常采用經過當地再校準的國際標準血漿作為標準血漿。具體方法如下。

（1）3.8%枸櫞酸鈉溶液：取無水枸櫞酸鈉9.5g，加水溶解并稀釋至250ml。

（2）咪唑緩沖液（pH7.3）：取咪唑0.68g和氯化鈉1.17g，加水使溶解成100ml，加入0.1mol/L鹽酸溶液42.2ml，再加水稀釋至200ml。

（3）稀釋液：取1體積的3.8%的枸櫞酸鈉加入5體積咪唑緩沖液混合，加適量20%人血清蛋白至終濃度為1%。

（4）激活的部分凝血活酶（APTT）試劑。

（5）人凝血因子FⅧ/FⅨ缺乏血漿：為人凝血因子FⅧ/FⅨ含量低于1%的人血漿或人工基質血漿。

（6）0.05mol/L氯化鈣溶液：取氯化鈣（CaCl ₂·2H ₂O）147g，加水溶解并稀釋至1000ml，配制成1mol/L的氯化鈣貯存液，用前用水稀釋20倍，配制成0.05mol/L氯化鈣溶液。

用人凝血因子Ⅷ缺乏血漿將標準品稀釋成每1ml含1IU凝血因子Ⅷ，再用稀釋液分別進行10倍、20倍、40倍和80倍稀釋，置冰浴待用。

用人凝血因子FⅧ/FⅨ缺乏血漿將供試品稀釋成每1ml含1IU凝血因子FⅧ/FⅨ，再用稀釋液進行10倍和20倍或40倍稀釋，置冰浴待用。

取激活的部分凝血活酶試劑0.1ml，置37℃水浴保溫一定時間（一般4分鐘），加入凝血因子FⅧ/FⅨ缺乏血漿0.1ml、供試品溶液0.1ml，混勻，置37℃水浴保溫一定時間（一般5分鐘），加已預熱至37℃ 0.05mol/L氯化鈣溶液0.1ml，記錄凝固時間。

用不同稀釋度的人凝血因子FⅧ/FⅨ標準溶液0.1ml替代供試品溶液，同法操作。

將標準溶液人凝血因子FⅧ/FⅨ效價（IU/ml）的對數對其相應的凝固時間（秒）的對數進行直線回歸處理，求出直線回歸方程。計算供試品溶液人凝血因子FⅧ/FⅨ效價，再乘以稀釋倍數，即為供試品人凝血因子FⅧ/FⅨ效價（IU/ml）。根據FⅧ：C/FⅨ：C水平的高低，將血友病A/B分為：重型（＜1%或＜0.01IU/ml）；中型（1%～5%或0.01～0.05IU/ml）；輕型（5%～25%或0.05～0.25IU/ml）；亞臨床型（25%～45%或0.25～0.45IU/ml）。

血友病患者血漿凝血因子抗原的測定具有重要意義，可以據此將血友病分為交叉反應物質陰性型（CRM-）和交叉反應物質陽性型（CRM+）兩個表現型。CRM-表現型常見于重型血友病，由于患者體內基本無FⅧ蛋白（抗原）的合成與分泌，替代治療采用的FⅧ則成為異體蛋白（抗原），誘導免疫反應，產生抑制物。而CRM+表現型多見于輕、中型血友病，在重型血友病患者中十分少見。由于患者可合成和分泌無功能活性的FⅧ蛋白（抗原），因此部分患者可形成免疫耐受，抑制物發生率低。近幾年來，免疫放射測定分析和ELISA分析開始用于FⅧ抗原測定，所用抗體多取自存在抑制物的血友病患者，由于超純FⅧ/FⅨ獲取困難，而動物的抗體可能與其他血漿蛋白發生交叉反應，僅有少數實驗室能夠進行FⅧ/Ⅸ抗原測定。但隨著技術的進步和ELISA技術的廣泛應用，目前FⅧ：Ag/FⅨ：Ag測定也越來越普及。