實驗一 蠕蟲蟲卵檢查操作技術

【實驗目的】

掌握直接涂片法、沉淀法及飽和鹽水漂浮法等蠕蟲蟲卵檢查操作技術，在顯微鏡下識別吸蟲卵、絳蟲卵、線蟲卵和棘頭蟲卵的形態特征。同時注意蟲卵與非蟲卵的區別。

【實驗內容】

1．直接涂片法。

2．沉淀法。

3．飽和鹽水漂浮法。

4．蟲卵與非蟲卵的區別。

5．各種蠕蟲卵的形態特征。

【材料與設備】

豬糞、兔糞、羊糞、食鹽、50%甘油水溶液（或清水）、火柴桿、載玻片、蓋玻片、鐵絲圈、紗布、吸管、燒杯、錐形瓶、玻璃棒、量筒、離心管、普通離心機、銅篩（40～60目）、光學顯微鏡。

【操作與觀察】

一、直接涂片法

取清潔載玻片一張，在載玻片中央滴加1～2滴50%甘油水溶液或清水，然后用鑷子或火柴桿取糞便一小塊（約黃豆大），與甘油溶液混勻，并將粗渣推向一邊，涂布均勻，做成涂片。涂片厚度以放到書上隱約可見下面的字跡為宜，加上蓋玻片，置顯微鏡下檢查。檢查時先在低倍鏡下查找，如發現蟲卵，再換高倍鏡仔細觀察。

本法操作簡便，能檢查各種蠕蟲卵，但檢出率不高，特別在輕度感染時，往往得不到可靠結果。因此，本法只能作為輔助診斷方法，并且每次檢查要重復8～10片，才能收到確實的效果。如無甘油，也可用清水代替，但不能用生理鹽水代替，因其易析出鹽結晶而影響檢查結果。如加甘油可使標本清晰，易于觀察，并可防止涂片很快干燥。

二、沉淀法

本法的基本原理是蟲卵的比重一般比水略重，糞便中的蟲卵可在水中自然沉淀于容器底部，而糞便中的飼料纖維和可溶性物質則混于或溶于糞液中。沉淀法可分為自然沉淀法和離心沉淀法兩種。

1．自然沉淀法：取糞便5～10g，置于200～300mL燒杯中，先加入少量水（5～10mL），用玻璃棒搗成糊狀，然后加入100～200mL清水，攪拌均勻，通過40～60目（網孔/英寸）銅篩過濾，濾液收集于燒杯中，靜置沉淀20～40min，倒去上層液，保留沉渣，再加水混勻，并沉淀，如此反復操作直到上層液透明為止，用吸管吸取沉渣進行鏡檢。此法適合于檢查吸蟲卵。

2．離心沉淀法：取糞便5～10g，置于200～300mL燒杯中，先加少量水（5～10mL），用玻璃棒搗成糊狀，然后加入50～100mL清水，攪拌均勻，通過40～60目銅篩過濾，濾液收集于燒杯中，然后分裝至離心管中，用天平配平后放入離心機內，以2000～2500r/min離心沉淀2min，取出后倒去上清，沉淀加清水攪勻，再離心，如此反復操作至上清透明為止，最后倒去部分上清，留約沉淀2倍的溶液量，用吸管吹打均勻后，吸取糞液進行鏡檢。該法可縮短檢查時間。

三、飽和鹽水漂浮法

本法基本原理是采用比重大于蟲卵的飽和溶液，使糞便中的蟲卵與糞渣分開而浮集于液體表面，形成一層蟲卵液膜，然后蘸取此液膜，進行鏡檢。

1．飽和鹽水的配制：加水至錐形瓶內煮沸，每1000mL水添加食鹽（普通食鹽）380～400g，在容器內溶解。再以雙層紗布或棉花過濾至另一潔凈容器內，待涼后即可使用（溶液涼后如出現食鹽結晶，則說明該溶液是飽和的，是合乎要求的，其比重為1.180，此溶液應保存于溫度不低于13℃的情況下，才能保持較高比重）。

2．操作方法：取糞便5～10g，置于200～300mL燒杯中，先加入少量飽和食鹽水（5～10mL），用玻璃棒搗成糊狀，然后再加入100～200mL飽和食鹽水，攪拌均勻，通過40～60目銅篩過濾，濾液收集于燒杯中，濾液靜置10～30min。此時，比飽和鹽水比重輕的蟲卵，大多浮集于液體表面，再用鐵絲圈蘸取此液膜，并抖落在載玻片上，蓋上蓋玻片，進行鏡檢。或者將此濾液直接倒入試管內加滿，蓋上蓋玻片（蓋玻片與液面完全接觸，不能留有氣泡），靜置10～30min，取下蓋玻片，放在載玻片上鏡檢，可以收到同樣效果。

本法檢出率高，在實際工作中已廣泛應用，可以檢查大多數線蟲卵和絳蟲卵。

為了提高漂浮法的檢出率，可用其他溶液代替飽和鹽水溶液，如用飽和硫代硫酸鈉溶液（1000mL沸水中溶解硫代硫酸鈉1750g，其比重在15～18℃時為1.370，在20～26℃時為1.410），以及飽和硫酸鎂溶液（1000mL沸水中溶解硫酸鎂920g，其比重為1.294），檢查豬的后圓線蟲卵和棘頭蟲卵時效果好。

四、蟲卵與非蟲卵的區別

鏡檢時要詳細觀察，嚴格區分蟲卵與非蟲卵。

1．蟲卵（圖1.1）：都有一定卵殼結構，并且有一定的形狀，如圓形、橢圓形、三角形等，多數是兩側對稱的，內含卵細胞或一個發育的幼蟲或毛蚴，有一定的顏色，如淡黃色、褐黃色、棕黃色、銀灰色。

2．非蟲卵：在糞便中容易與蟲卵混淆的雜物有各種植物細胞、花粉顆粒、脂肪球、氣泡、真菌孢子、螨類及其卵、纖毛蟲等。這些物質由于種類不同，其形狀、大小、顏色也各不相同。如各種植物細胞，有的呈螺旋形，有的呈雙層環狀物，也有的呈鋪石狀，但都有明顯的細胞壁，與蟲卵結構明顯不同。各種花粉顆粒，往往都帶有一定的顏色，易被誤認為是蛔蟲卵，但花粉顆粒沒有卵殼的構造，表面呈網狀或鋸齒狀，仔細觀察，可以區別。還有脂肪球和氣泡之類，也很像蟲卵，但脂肪球和氣泡往往大小不一，無色，且折光性很強，周圍壁較厚，而內部是空虛的，不具有蟲卵的一般結構。總之，糞便中與蟲卵混淆的雜物較多，但只要掌握蟲卵的構造和特征是可以辨認的。有時某物與蟲卵分辨不清，也可用解剖針輕輕推動蓋玻片，使其下的東西滾動，這樣可以將蟲卵和其他物體區別開來。

五、各種蠕蟲卵的形態特征

1．吸蟲卵（圖1.2）：多呈卵圓形或橢圓形，大小不一，卵殼由數層膜組成，比較厚而堅實。大多數吸蟲卵的一端有卵蓋（日本血吸蟲卵除外）。新排出的吸蟲卵內一般含有較多的卵黃細胞及其包圍的胚細胞，有的則含有成形的毛蚴。吸蟲卵常呈黃色、黃褐色或灰色，內容物較充滿。

2．線蟲卵（圖1.3）：形狀大小各不相同，一般呈橢圓形或近似圓形；光學顯微鏡下可見卵殼由兩層組成，殼內有卵細胞，但有的線蟲卵排到外界時，其內已含有幼蟲。殼表面多數光滑，有的凹凸不平，顏色多為無色、透明，有些呈灰白色、褐色或黃褐色。蛔蟲卵卵殼最厚，其他多數較薄。

3．絳蟲卵（圖1.4）：家畜中常見的為圓葉目絳蟲蟲卵，但實際上并非蟲卵，而是卵中胚胎，多呈圓形、方形或三角形。大小不一，外層多數較厚，內有一個特殊的梨形器。梨形器內含有六鉤蚴，在高倍鏡下可以看到3對小鉤狀物；顏色多數為無色，少數為黃色或黃褐色。

4．棘頭蟲卵（圖1.5）：多呈橢圓形或長橢圓形，卵殼很厚，外膜上常呈點狀或蜂窩狀構造，卵內中央有一個長橢圓形胚胎，胚胎一端有六個小鉤，顏色多呈棕黃色或暗褐色。

【注意事項】

1．供檢查的糞便要新鮮。糞便編號清楚，避免混淆。

2．在挑取糞便時要適量，過多會影響視野的光線，過少可能檢查不出蟲卵。

3．在檢查過程中，糞便不能相互污染。已用過的工具，必須進行消毒或另換工具才能檢查第二個糞樣。

4．鏡檢時仔細觀察，嚴格區別蟲卵與非蟲卵。

【思考題】

1．在顯微鏡下怎樣識別蟲卵與非蟲卵？

2．飽和鹽水漂浮法檢查蟲卵的基本原理是什么？

3．直接涂片法、沉淀法及飽和鹽水漂浮法各自的優缺點是什么？

【實驗報告要求】

1．記錄實驗結果。

2．繪制兩種以上蟲卵形態圖。