1.1.1 ELISA技術的實驗原理

ELISA包括直接法、間接法、雙抗夾心法、競爭法及抗酶抗體法等幾種類型。本節主要介紹比較常用的間接法、雙抗夾心法和競爭法的基本原理。

1．間接法

該法是用來檢測待測抗體最常用的方法。具體原理為將已知抗原吸附于固相載體上，加入待測樣品（如含有待測抗體的動物血清），待測抗體與抗原結合，洗滌未結合抗體，再加入酶標二抗（用酶標記的能夠特異性識別結合待測抗體的第二抗體），形成抗原-待測抗體-酶標二抗復合物，當進一步在反應體系中加入酶的反應底物后，有色產物的形成量與待測抗體的量成正比。實驗原理如圖1-1所示。

圖1-1 間接法ELISA實驗原理

資料來源：錢旻主編《免疫學原理與技術》

2．雙抗夾心法

此法用于檢測待測抗原。假設待測抗原表面有多個抗原決定簇A、B、C等，首先將能特異性結合待測抗原上A抗原決定簇的抗體（簡稱抗體A）包被于固相載體，然后加入待測樣品（如含有待測抗原的動物組織或器官的組織勻漿液），使抗原抗體特異性識別結合，洗滌未結合的無關抗原后，再加入酶標記的能特異性識別結合待測抗原上B抗原決定簇的抗體（簡稱抗體B），形成“抗體A-待測抗原-酶標抗體B”共同構成的復合物。當加入酶反應的底物后，有色產物的形成量與待測抗原的量成正比，如圖1-2所示。

圖1-2 雙抗夾心法ELISA實驗原理

資料來源：錢旻主編《免疫學原理與技術》

3．競爭法

競爭法既可用于檢測抗原，又可用于檢測抗體。以檢測抗原為例，將能與待測抗原特異性結合的抗體包被于固相載體上，加入待測抗原和一定量的已知酶標抗原，使二者競爭性地與包被的抗體結合，如待測抗原的量大于酶標抗原，酶標抗原與包被的抗體結合得少，進而形成的標記復合物也少，反之亦然，因此最終有色產物的形成量與待測抗原含量成反比，如圖1-3所示。

圖1-3 競爭法ELISA實驗原理

資料來源：錢旻主編《免疫學原理與技術》