- 免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理與應(yīng)用
- 王睿
- 643字
- 2021-08-27 17:46:31
1.2 放射免疫技術(shù)
放射免疫技術(shù)最早源于1959年3位美國(guó)科學(xué)家Roger Guillemin、Andrew V. Schally和Rosalyn Yalow利用放射線物質(zhì)檢測(cè)胰島素的偶然實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),他們將放射性核素可探測(cè)的靈敏度、精確性與抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合,從而創(chuàng)建了這類免疫測(cè)定技術(shù)。因?yàn)檫@個(gè)重大的發(fā)現(xiàn)和創(chuàng)新,他們共同獲得了1977年的諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。從嚴(yán)格定義角度來講,3位科學(xué)家當(dāng)年所創(chuàng)立的方法叫作放射免疫分析法(Radioimmunoassay, RIA),是以放射性核素標(biāo)記的抗原與反應(yīng)體系中未標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合特異性抗體為基本原理來測(cè)定待測(cè)樣品中抗原量的一種方法,是一種放射性競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合分析。1968年,Miles和Hales在此基礎(chǔ)上開發(fā)出了用同位素標(biāo)記的抗體直接檢測(cè)抗原物質(zhì)的非競(jìng)爭(zhēng)性免疫放射分析法(Immunoradiometric Assay, IRMA),將放射免疫技術(shù)的靈敏度在RIA的基礎(chǔ)上又提高了10~100倍,且擴(kuò)展了檢測(cè)范圍,增強(qiáng)了反應(yīng)的特異性。
總體來說,放射免疫技術(shù)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、樣品用量少等優(yōu)點(diǎn),目前廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)、臨床診斷、農(nóng)業(yè)科學(xué)、生態(tài)學(xué)、環(huán)境科學(xué)等多學(xué)科、多領(lǐng)域研究中,對(duì)各種微量或超微量(10-9~10-15g/mL)元素、激素、小分子藥物及腫瘤標(biāo)記物等幾乎所有生物活性物質(zhì)的定量分析。但由于放射線輻射和污染等缺點(diǎn),限制了放射免疫技術(shù)的使用范圍。
放射免疫技術(shù)常用的放射性物質(zhì)有125I、131I、3H、14C、35S、32P等,各種同位素均有其各自優(yōu)缺點(diǎn),實(shí)驗(yàn)室往往根據(jù)自身需要及條件做相應(yīng)的選擇,如3H半衰期長(zhǎng)、能量低、易于防護(hù)、不易影響標(biāo)記物質(zhì)的化學(xué)性質(zhì),但標(biāo)記條件要求高,需專門機(jī)構(gòu)方可完成等。
下面以放射免疫分析法測(cè)試人血清中甲胎蛋白(AFP)為例,詳細(xì)介紹RIA的實(shí)驗(yàn)過程。
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