4.3　儀器結構與原理

常用的熒光測定儀器有熒光分光光度計，一般由光源、單色儀、樣品池、檢測器及數據記錄系統組成。儀器的基本構造如圖4-4所示。

圖4-4　熒光分光光度計結構框圖

由光源發出的光經過單色儀后得到所需要的激發光波長，入射到樣品池上激發熒光物質產生熒光，為消除入射光及散射光的影響，熒光的測量方向通常與激發光成90°角。熒光通過第二個單色儀分光后進入檢測器而被檢測。第二個單色儀的作用是消除溶液中可能存在的其他波長的光的干擾。

（1）光源　高壓氙燈是目前熒光分光光度計中應用最為廣泛的一種光源，在400～800nm波長范圍內提供連續的光。此外，發光二極管或者激光二極管也可作為光源，這類光源輕便、所需能量較少，產生的熱量很少。發光二極管屬于連續光源但限于小范圍光譜區的輸出，而激光二極管則屬于單色光源。激光是一種能量集中、具有良好單色性的光源，使用激光源能夠極大地提高熒光檢測的靈敏度。利用激光作為光源的激光誘導熒光檢測技術已經實現了單分子檢測的目標，從而使熒光分析具有更為廣闊的應用。

（2）單色儀　單色儀的作用是對波長進行選擇，包括激發波長和發射波長。常用的單色儀有光柵和濾光片。

（3）樣品池　熒光檢測的樣品池通常采用四面透光的方形石英池。

（4）檢測器　現代熒光分光光度計普遍采用光電倍增管（PMT）作為檢測器。電荷耦合器件（charge-coupled device，CCD）是一種多通道檢測器，具有連續采集多維圖譜的功能。CCD作為檢測器已在熒光顯微鏡上得到廣泛應用。

（5）數據記錄系統　目前商品化的熒光分光光度計都由計算機控制，并配有相應的軟件。