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1.4 特點與應用

1.4.1 紫外-可見吸收光譜法的特點

紫外-可見吸收光譜法是根據分子對紫外和可見光譜區輻射能的吸收特性所建立起來的一種研究物質組成和結構的分析方法,具有應用范圍廣、靈敏度高、選擇性好、準確度高、儀器成本低及操作簡單等特點。

1.4.2 紫外-可見吸收光譜法的應用

紫外-可見吸收光譜法是結構分析、定性、定量分析的常用手段,同時還可以測定某些化合物的物理化學參數。

(1)紫外-可見吸收光譜在結構分析上的應用

紫外-可見吸收光譜的吸收帶與化合物的結構有關。共軛體系會產生很強的K吸收帶,通過繪制吸收光譜,可以判斷化合物是否存在共軛體系或共軛的程度。有機物的不少基團(生色團),如羰基、苯環、硝基、共軛體系等,都有其特征的紫外或可見吸收帶。

Woodward和Fieser在大量觀測的基礎上,提出了計算共軛體系和α,β-不飽和醛酮化合物的最大吸收波長經驗規則,稱為Woodward-Fieser規則。如表1-2所示,。

表1-2 計算二烯烴或多烯烴的最大吸收位置

注:當兩種情況的二烯烴體系同時存在時,選擇波長較長的為其母體系統,即選用基數為253nm。

Woodward-Fieser規則的詳細內容,可以閱讀有關參考書。

(2)紫外-可見吸收光譜在定性分析上的應用

通過分析吸收譜圖推測化合物的結構。吸收光譜的產生取決于化合物中的發色團和助色團。大多數化合物的紫外光譜帶數目不多,而且譜寬較寬,不像紅外光譜的特征區和指紋區能夠表明一些結構。但紫外光譜帶的波長范圍、溶劑效應以及pH效應等,同樣能提供一些信息。例如,樣品溶液的吸收譜圖隨pH的變化而變化,那么就說明樣品化合物含有酚或芳香胺的結構。將化合物吸收曲線與標準譜圖對比,是有機化合物結構鑒定的一個重要的輔助手段。

(3)紫外-可見吸收光譜在定量測定上的應用

①標準對照法 在相同條件下,在λmax下平行測定試樣和某一濃度cs(應與試液濃度接近)的標準溶液的吸光度AxAs,則

標準溶液 As=kcs

被測溶液 Ax=kcs

將兩者進行比較,由cs可計算試樣溶液中被測物質的濃度cx,即

cx=csAx/As

因為此法只使用單個標準,引起誤差的偶然因素較多,故結果不一定可靠。

②標準曲線法 首先配制一系列濃度的標準溶液,以不含被測組分的空白溶液作為參比,在λmax處分別測定標準溶液的吸光度,繪制吸光度-濃度曲線(A-c曲線),稱為標準曲線(也叫校正曲線或工作曲線)。在完全相同條件下測定試樣溶液的吸光度,從標準曲線上找出與之對應的濃度。這是實際工作中最常用的一種方法。

應用示例:紫外-可見吸收光譜法測定沉香中色酮類化合物的含量。

a.標準曲線制作

配制濃度為1mg·mL-1、5mg·mL-1、10 μg·mL-1、25mg·mL-1、40mg·mL-1、50mg·mL-1、80mg·mL-1的色酮標準溶液,在250nm波長下測定其吸光度,繪制標準曲線,如圖1-4所示。

圖1-4 色酮類化合物標準曲線

b.紫外-可見分光光度計測定

精確稱取1.000g過40目篩的沉香藥材粉末,用乙醇加熱回流提取2h,冷卻至室溫,過濾,濃縮,重復2次,得到沉香的乙醇提取物,將提取物配制成0.1g·L-1的待測溶液。在250nm處測吸光度,根據標準曲線,測定樣品中色酮類化合物的含量。

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