工作任務(wù)

任務(wù)1　MS培養(yǎng)基母液的配制與保存

一、工作目標

通過此項工作掌握植物組織培養(yǎng)中母液配制與保存的基本知識，并掌握MS培養(yǎng)基母液的配制與保存技術(shù)。

二、材料用具

配制MS培養(yǎng)基母液所需各種藥品、蒸餾水、電子天平、燒杯、量筒、定容瓶、母液瓶、標簽、冰箱、濾紙等。

三、工作過程

1．母液的配制

參見表2-4。

（1）母液1的配制　先按照擴大的倍數(shù)計算稱取量，用天平稱取母液1的各種藥品，用蒸餾水將藥品分別溶解，然后依次混合，定容為1L，成為10倍液。

（2）母液2的配制　先按照擴大的倍數(shù)計算稱取量，用天平稱取母液2的各種藥品，用蒸餾水將藥品分別溶解，然后依次混合，定容為500mL，成為100倍液。

（3）母液3的配制　先按照擴大的倍數(shù)計算稱取量，用天平稱取母液3的各種藥品，用蒸餾水將藥品分別溶解，然后依次混合，定容為500mL，成為100倍液。

（4）母液4的配制　先按照擴大的倍數(shù)計算稱取量，用天平稱取母液4的各種藥品，用蒸餾水將藥品分別溶解，然后依次混合，定容為1L，成為100倍液。

（5）母液5的配制　先按照擴大的倍數(shù)計算稱取量，用天平稱取母液5的各種藥品，用蒸餾水將藥品分別溶解，然后依次混合，定容為1L，成為100倍液。

（6）母液6的配制　先按照擴大的倍數(shù)計算稱取量，用天平稱取母液6的各種藥品，用蒸餾水將藥品分別溶解，然后依次混合，定容為100mL，成為100倍液。

2．母液的保存

（1）裝瓶　將配制好的母液分別倒入瓶中，瓶上貼好標簽，注明培養(yǎng)基名稱、母液號、擴大倍數(shù)與配制日期。

（2）貯藏　將母液瓶儲放在5℃左右的冰箱中保存。

四、注意事項

（1）各種藥品一定要充分溶解后才能混合。

（2）一定將配好的母液做好標記，以免弄混。

五、考核內(nèi)容與評分標準

1．相關(guān)知識

培養(yǎng)基由哪些成分組成，如何配制和保存（30分）?

2．操作技能

（1）掌握培養(yǎng)基母液的操作流程（40分）。

（2）掌握母液保存技能（30分）。

任務(wù)2　常用激素母液的配制與保存

一、工作目標

通過此項工作掌握植物組織培養(yǎng)中激素母液配制與保存的基本知識，并掌握常用激素基母液的配制與保存技術(shù)。

二、材料用具

NAA、2，4-D、6-BA、IBA、蒸餾水、電子天平、燒杯、量筒、定容瓶、母液瓶、標簽、冰箱、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、95%乙醇、濾紙等。

三、工作過程

一般來說，配制生長素類物質(zhì)（如IAA、2，4-D、NAA等）時，將其先溶于少量95%酒精溶液中或1mol/L NaOH中，待其充分溶解后，加水定容到所要求的濃度。而細胞分裂素類物質(zhì)（如KT、6-BA等）要先溶于少量1mol/L HCl中，待其充分溶解后，再加水定容到所要求的濃度。現(xiàn)以配制100mL、0.1mg/mL的NAA為例說明激素母液配制具體過程。

（1）稱量　用電子天平準確稱量NAA 10mg。

（2）溶解　將NAA溶于少量95%乙醇中或1mol/L NaOH中。

（3）定容　將NAA溶液倒入100mL定容瓶中，并加蒸餾水至水位線。

（4）保存　將100mL NAA溶液倒入母液瓶中，并貼好標簽，注明母液名稱、配制濃度、配制日期等，置于冰箱中保存。

四、注意事項

（1）溶解藥品時所用的1mol/L NaOH、1mol/L HCl、95%乙醇不能加入過多。

（2）一定將配好的母液做好標記，以免弄混。

五、考核內(nèi)容與評分標準

1．相關(guān)知識

各激素母液分別需要用什么物質(zhì)溶解，如何配制和保存（30分）?

2．操作技能

（1）掌握配制激素母液的操作流程（40分）。

（2）掌握母液保存技能（30分）。

任務(wù)3　MS固體培養(yǎng)基的配制與滅菌

一、工作目標

通過此項工作掌握植物組織培養(yǎng)中固體培養(yǎng)基的配制與滅菌的基本知識，并掌握MS固體培養(yǎng)基的配制與滅菌技術(shù)。

二、材料用具

配制MS培養(yǎng)基所需的各種母液、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)母液、瓊脂、蔗糖、蒸餾水、移液管、量筒、定容瓶、電爐、酸度計或pH試紙、0.1mol/L NaOH、0.1mol/L HCl、培養(yǎng)瓶、標簽、鉛筆等。

三、工作過程

（一）培養(yǎng)基配制方法

（1）按母液順序和規(guī)定量，用吸管提取母液，放入盛有一定量蒸餾水的量筒。

（2）加入生長調(diào)節(jié)物質(zhì)：視配制的培養(yǎng)基而定。

（3）加入蔗糖：30g/L。

（4）加蒸餾水定容后倒入鍋中。

（5）調(diào)節(jié)pH值：用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl調(diào)節(jié)pH值。

（6）熔化瓊脂：6.5g/L（視瓊脂質(zhì)量而定）在電爐上加熱溶液，并不斷攪拌，使瓊脂溶化。

（7）培養(yǎng)基的分裝與封口：將培養(yǎng)基裝入培養(yǎng)瓶中并封口。

（二）滅菌方法

1．高壓蒸汽滅菌

（1）洗滌　把培養(yǎng)皿、三角瓶等器皿徹底清洗干凈。

（2）包扎　用報紙把培養(yǎng)皿、剪刀、鑷子等包好。

（3）滅菌　打開鍋蓋，加水至水位線。把已裝好培養(yǎng)基的三角瓶，連同蒸餾水及接種用具等放入鍋筒內(nèi)，裝時不要過分傾斜培養(yǎng)基，以免弄到瓶口上或流出。然后蓋上鍋蓋，對角旋緊螺絲，接通電源加熱，當升至0.05MPa時，打開放氣閥放氣，指針回到“0”后關(guān)閉放氣閥。當氣壓上升到0.10MPa時，保壓滅菌20min，到時停止加熱。當氣壓回到“0”后打開鍋蓋，取出培養(yǎng)基和滅菌用品，放于平臺上冷凝。

（4）貯藏　滅好菌的培養(yǎng)基放置于溫度低于30℃，沒有強光照射的地方，但不要放置時間太長，最多不能超過1周。

2．干熱滅菌

（1）洗滌　把培養(yǎng)皿、三角瓶等器皿徹底清洗干凈。

（2）滅菌　150℃，1h。

四、注意事項

（1）配制前要做好配制計劃。

（2）在使用高壓鍋滅菌時要嚴格按照規(guī)范操作。

五、考核內(nèi)容與評分標準

1．相關(guān)知識

培養(yǎng)基由哪些成分組成，如何進行配制（30分）?

2．操作技能

（1）掌握配制液體培養(yǎng)基的操作流程（20分）。

（2）掌握配制固體培養(yǎng)基的操作流程（30分）。

（3）掌握培養(yǎng)基滅菌技能（20分）。

任務(wù)4　培養(yǎng)基配方的設(shè)計

一、工作目標

通過此項工作掌握植物組織培養(yǎng)中培養(yǎng)基的主要成分及配方的基本知識，并掌握培養(yǎng)基配方的設(shè)計技術(shù)。

二、具體要求

設(shè)計一個需要配制1L的固體培養(yǎng)基的配方，配方中要求包括培養(yǎng)基的基本成分。

三、基本操作

1．基本培養(yǎng)基的選擇

由于MS培養(yǎng)基成分完全，適于許多植物的培養(yǎng)，因此選擇培養(yǎng)基時，首先用MS培養(yǎng)基試用，合適就定為基本培養(yǎng)基，不合適再選擇其他培養(yǎng)基配方，如B₅、N₆、White等。如果有合適的就選用，如何不合適就進行基本培養(yǎng)基各組分的正交試驗，直到選擇出合適的基本培養(yǎng)基。

2．植物激素配比的選擇

通常是細胞分裂素和生長素各濃度之間的配比組合。各激素的選擇和濃度的配比要適合該培養(yǎng)基的用途。

3．糖濃度的選擇

糖濃度的選擇一般比較簡單，通常情況下選用2%或3%，但有時也根據(jù)植物或培養(yǎng)目的的不同有所調(diào)整。

4．瓊脂濃度的選擇

瓊脂的用量在6～10g/L之間，若濃度太高，培養(yǎng)基就會變得很硬，營養(yǎng)物質(zhì)難以擴散到培養(yǎng)的組織中去。若濃度過低，凝固性不好。有時瓊脂的濃度要根據(jù)瓊脂的質(zhì)量來確定。

5．其他物質(zhì)的選擇

有時要根據(jù)培養(yǎng)基用途的不同考慮加入其他物質(zhì)，如有機附加物、活性炭、抗壞血酸等。選擇時要根據(jù)各物質(zhì)的用途確定是否加入和加入的量。

四、考核內(nèi)容與評分標準

1．相關(guān)知識

培養(yǎng)基由哪些成分組成（20分）?

2．操作技能

（1）掌握培養(yǎng)基的設(shè)計流程（40分）。

（2）掌握激素的設(shè)計流程（40分）。