工作任務

任務1　MS培養基母液的配制與保存

一、工作目標

通過此項工作掌握植物組織培養中母液配制與保存的基本知識，并掌握MS培養基母液的配制與保存技術。

二、材料用具

配制MS培養基母液所需各種藥品、蒸餾水、電子天平、燒杯、量筒、定容瓶、母液瓶、標簽、冰箱、濾紙等。

三、工作過程

1．母液的配制

參見表2-4。

（1）母液1的配制　先按照擴大的倍數計算稱取量，用天平稱取母液1的各種藥品，用蒸餾水將藥品分別溶解，然后依次混合，定容為1L，成為10倍液。

（2）母液2的配制　先按照擴大的倍數計算稱取量，用天平稱取母液2的各種藥品，用蒸餾水將藥品分別溶解，然后依次混合，定容為500mL，成為100倍液。

（3）母液3的配制　先按照擴大的倍數計算稱取量，用天平稱取母液3的各種藥品，用蒸餾水將藥品分別溶解，然后依次混合，定容為500mL，成為100倍液。

（4）母液4的配制　先按照擴大的倍數計算稱取量，用天平稱取母液4的各種藥品，用蒸餾水將藥品分別溶解，然后依次混合，定容為1L，成為100倍液。

（5）母液5的配制　先按照擴大的倍數計算稱取量，用天平稱取母液5的各種藥品，用蒸餾水將藥品分別溶解，然后依次混合，定容為1L，成為100倍液。

（6）母液6的配制　先按照擴大的倍數計算稱取量，用天平稱取母液6的各種藥品，用蒸餾水將藥品分別溶解，然后依次混合，定容為100mL，成為100倍液。

2．母液的保存

（1）裝瓶　將配制好的母液分別倒入瓶中，瓶上貼好標簽，注明培養基名稱、母液號、擴大倍數與配制日期。

（2）貯藏　將母液瓶儲放在5℃左右的冰箱中保存。

四、注意事項

（1）各種藥品一定要充分溶解后才能混合。

（2）一定將配好的母液做好標記，以免弄混。

五、考核內容與評分標準

1．相關知識

培養基由哪些成分組成，如何配制和保存（30分）?

2．操作技能

（1）掌握培養基母液的操作流程（40分）。

（2）掌握母液保存技能（30分）。

任務2　常用激素母液的配制與保存

一、工作目標

通過此項工作掌握植物組織培養中激素母液配制與保存的基本知識，并掌握常用激素基母液的配制與保存技術。

二、材料用具

NAA、2，4-D、6-BA、IBA、蒸餾水、電子天平、燒杯、量筒、定容瓶、母液瓶、標簽、冰箱、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、95%乙醇、濾紙等。

三、工作過程

一般來說，配制生長素類物質（如IAA、2，4-D、NAA等）時，將其先溶于少量95%酒精溶液中或1mol/L NaOH中，待其充分溶解后，加水定容到所要求的濃度。而細胞分裂素類物質（如KT、6-BA等）要先溶于少量1mol/L HCl中，待其充分溶解后，再加水定容到所要求的濃度。現以配制100mL、0.1mg/mL的NAA為例說明激素母液配制具體過程。

（1）稱量　用電子天平準確稱量NAA 10mg。

（2）溶解　將NAA溶于少量95%乙醇中或1mol/L NaOH中。

（3）定容　將NAA溶液倒入100mL定容瓶中，并加蒸餾水至水位線。

（4）保存　將100mL NAA溶液倒入母液瓶中，并貼好標簽，注明母液名稱、配制濃度、配制日期等，置于冰箱中保存。

四、注意事項

（1）溶解藥品時所用的1mol/L NaOH、1mol/L HCl、95%乙醇不能加入過多。

（2）一定將配好的母液做好標記，以免弄混。

五、考核內容與評分標準

1．相關知識

各激素母液分別需要用什么物質溶解，如何配制和保存（30分）?

2．操作技能

（1）掌握配制激素母液的操作流程（40分）。

（2）掌握母液保存技能（30分）。

任務3　MS固體培養基的配制與滅菌

一、工作目標

通過此項工作掌握植物組織培養中固體培養基的配制與滅菌的基本知識，并掌握MS固體培養基的配制與滅菌技術。

二、材料用具

配制MS培養基所需的各種母液、生長調節物質母液、瓊脂、蔗糖、蒸餾水、移液管、量筒、定容瓶、電爐、酸度計或pH試紙、0.1mol/L NaOH、0.1mol/L HCl、培養瓶、標簽、鉛筆等。

三、工作過程

（一）培養基配制方法

（1）按母液順序和規定量，用吸管提取母液，放入盛有一定量蒸餾水的量筒。

（2）加入生長調節物質：視配制的培養基而定。

（3）加入蔗糖：30g/L。

（4）加蒸餾水定容后倒入鍋中。

（5）調節pH值：用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl調節pH值。

（6）熔化瓊脂：6.5g/L（視瓊脂質量而定）在電爐上加熱溶液，并不斷攪拌，使瓊脂溶化。

（7）培養基的分裝與封口：將培養基裝入培養瓶中并封口。

（二）滅菌方法

1．高壓蒸汽滅菌

（1）洗滌　把培養皿、三角瓶等器皿徹底清洗干凈。

（2）包扎　用報紙把培養皿、剪刀、鑷子等包好。

（3）滅菌　打開鍋蓋，加水至水位線。把已裝好培養基的三角瓶，連同蒸餾水及接種用具等放入鍋筒內，裝時不要過分傾斜培養基，以免弄到瓶口上或流出。然后蓋上鍋蓋，對角旋緊螺絲，接通電源加熱，當升至0.05MPa時，打開放氣閥放氣，指針回到“0”后關閉放氣閥。當氣壓上升到0.10MPa時，保壓滅菌20min，到時停止加熱。當氣壓回到“0”后打開鍋蓋，取出培養基和滅菌用品，放于平臺上冷凝。

（4）貯藏　滅好菌的培養基放置于溫度低于30℃，沒有強光照射的地方，但不要放置時間太長，最多不能超過1周。

2．干熱滅菌

（1）洗滌　把培養皿、三角瓶等器皿徹底清洗干凈。

（2）滅菌　150℃，1h。

四、注意事項

（1）配制前要做好配制計劃。

（2）在使用高壓鍋滅菌時要嚴格按照規范操作。

五、考核內容與評分標準

1．相關知識

培養基由哪些成分組成，如何進行配制（30分）?

2．操作技能

（1）掌握配制液體培養基的操作流程（20分）。

（2）掌握配制固體培養基的操作流程（30分）。

（3）掌握培養基滅菌技能（20分）。

任務4　培養基配方的設計

一、工作目標

通過此項工作掌握植物組織培養中培養基的主要成分及配方的基本知識，并掌握培養基配方的設計技術。

二、具體要求

設計一個需要配制1L的固體培養基的配方，配方中要求包括培養基的基本成分。

三、基本操作

1．基本培養基的選擇

由于MS培養基成分完全，適于許多植物的培養，因此選擇培養基時，首先用MS培養基試用，合適就定為基本培養基，不合適再選擇其他培養基配方，如B₅、N₆、White等。如果有合適的就選用，如何不合適就進行基本培養基各組分的正交試驗，直到選擇出合適的基本培養基。

2．植物激素配比的選擇

通常是細胞分裂素和生長素各濃度之間的配比組合。各激素的選擇和濃度的配比要適合該培養基的用途。

3．糖濃度的選擇

糖濃度的選擇一般比較簡單，通常情況下選用2%或3%，但有時也根據植物或培養目的的不同有所調整。

4．瓊脂濃度的選擇

瓊脂的用量在6～10g/L之間，若濃度太高，培養基就會變得很硬，營養物質難以擴散到培養的組織中去。若濃度過低，凝固性不好。有時瓊脂的濃度要根據瓊脂的質量來確定。

5．其他物質的選擇

有時要根據培養基用途的不同考慮加入其他物質，如有機附加物、活性炭、抗壞血酸等。選擇時要根據各物質的用途確定是否加入和加入的量。

四、考核內容與評分標準

1．相關知識

培養基由哪些成分組成（20分）?

2．操作技能

（1）掌握培養基的設計流程（40分）。

（2）掌握激素的設計流程（40分）。