工作任務

任務　植物組織培養實驗室規劃設計與預算

一、工作目標

掌握如何組建植物組織培養實驗室；掌握組培中涉及的各種儀器設備和器皿用具的使用方法和注意事項。能夠獨立完成植物組織培養實驗室的設計；能夠對組培中涉及的各種儀器設備和器皿用具進行正確的使用。

二、場所及材料用具

組織培養實訓室、超凈工作臺、高壓滅菌鍋、人工氣候箱、冰箱、天平、培養箱、接種器具、玻璃器具、各種培養瓶。

三、工作過程

（一）植物組織培養實驗室的規劃設計

指導老師先講解組織培養實驗室各組成部分（準備室、緩沖室、無菌操作室、培養室、馴化室、溫室）及使用功能，然后講解實驗室生產安全守則及有關注意事項。

（1）準備室（化學實驗室）　主要用于蒸餾水的制備，以及生理、生化分析；器皿洗滌；培養基制備、分裝、高壓滅菌；植物材料的預處理和試管苗的出瓶、清洗與整理工作。

（2）緩沖室　在此室內換上經過滅菌的衛生服、拖鞋、戴上口罩，防止雜菌帶入無菌操作室。此室安裝有紫外燈、照明燈等。

（3）無菌操作室（無菌接種室）　主要用于材料的滅菌接種；無菌材料的繼代和叢生苗的增殖或切割嫩莖插枝生根。主要儀器設備有超凈工作臺、空調、接種工具、器械支架。

（4）培養室　主要用于組培苗的培養。主要儀器有空調、除濕機、各類顯微鏡、溫濕度計。

（5）馴化室　主要用于試管苗的馴化。

（6）溫室　主要用于試管苗移栽后的管理，要求清潔無菌，配有光溫調節裝置、通風口等。用于試管苗不分季節的常年生產。

（二）植物組織培養實驗室的主要儀器設備的使用

（1）分注器　用于分注培養基。

（2）移液槍　用于配制培養基時添加各種母液及吸取定量植物生長調節劑時使用。

（3）過濾滅菌器　用于加熱易分解、喪失活性的生化試劑的滅菌。

（4）電爐等加熱工具　用于配制培養基時加熱溶解瓊脂用。

（5）酸度計　用于測量和調整培養基的pH值。

（6）天平　稱量化學試劑。

（7）磁力攪拌器　攪拌、溶解化學試劑。

（8）高溫高壓滅菌器　主要用于濕熱滅菌。

（9）烘箱　干熱滅菌（160～180℃/1～3h）、烘干組織（80℃）、迅速干燥洗滌后的玻璃器皿（80～100℃）。

（10）冰箱　儲存培養基母液、生化試劑及低溫處理材料時使用。

（11）搖床或轉床　用于進行細胞懸浮培養或液體懸浮培養。

（12）顯微鏡　用于觀察和解剖。

（三）植物組織培養實驗室的主要器具的使用

1．培養基配制用具

（1）燒杯　用來盛放、溶解化學藥品。

（2）容量瓶　用來配制標準溶液。

（3）量筒　用來量取一定體積的液體。

（4）刻度移液管　用來量取一定體積的液體。

（5）吸管　用來吸取液體，調節培養基的pH值及溶液定容時使用。

（6）玻璃棒　溶解化學藥劑時攪拌用。

2．培養容器

（1）試管　適合少量培養基及試驗各種不同配方時使用。

（2）三角瓶　適合各種培養。

（3）廣口培養瓶　常用作試管苗大量繁殖用。

（4）培養皿　在無菌材料分離和細胞培養時使用。

（5）封口材料　棉花塞、鋁箔、耐高溫透明塑料紙、專用蓋、蠟膜。

3．接種用具

（1）接種燈　用于金屬接種工具的滅菌。

（2）手持噴霧器　盛裝70%酒精，用于接種器材、外置提盒操作人員手部的表面滅菌。

（3）鑷子尖頭鑷子

（4）解剖針、解剖刀等。

（5）剪刀　用于剪取外植體材料。

4．用具的洗滌

（1）玻璃器皿的洗滌　對于新購置的玻璃器皿（器壁上或多或少留有游離的堿性物質）使用前要先用1%的稀HCl浸泡一夜，再用肥皂水洗凈，清水沖洗后，用蒸餾水再沖一遍，晾干備用；對于用過的玻璃器皿，用清水沖洗，再用蒸餾水沖洗一遍，干后備用；對于已被污染的玻璃器皿，先在121℃高壓蒸汽條件下滅菌30min后，倒去殘渣，用毛刷刷去器皿壁上的污染物，再用清水沖洗干凈，蒸餾水淋洗一遍，晾干備用。

（2）金屬用具的洗滌　對于新購置的金屬用具（表面有一層油脂）要先擦凈油脂后再用熱肥皂水洗凈，清水沖洗后，擦干備用；對于用過的金屬用具用清水洗凈，擦干備用。

5．用具的滅菌

參見表1-1。

四、考核內容與評分標準

1．相關知識

（1）組培實驗室各個環節設施功能和設計原理（10分）。

（2）各個儀器設備的使用方法和注意事項（20分）。

（3）各個器具用品的規范使用方法。（20分）

2．操作技能

（1）設計組培實驗室技能（20分）。

（2）掌握組培相關儀器設備的使用技能（10分）。

（3）熟練相關用具的使用、洗滌和滅菌技能（20分）。