- 結核病臨床診治進展年度報告(2014)
- 唐神結
- 1447字
- 2019-12-27 12:06:47
一、涂片鏡檢和分離培養鑒定
(一)涂片鏡檢法
1.痰標本收集策略的研究
印度Chandra等 [1]在1537名患者中,收集就診當天間隔一小時的兩份痰標本以及次日晨痰標本,同步進行標準抗酸染色法(Ziehl-Neelsen,ZN)以及改良ZN法鏡檢。前者陽性率為9.8%,比后者高0.37%。研究認為就診當天間隔一小時的兩份痰標本可用于改良式ZN染色鏡檢對肺結核的診斷。與此相反,印度學者Nayak等 [2]收集了2012年10月到2013年3月的2251位成人疑似結核患者就診當天間隔1小時的兩個痰標本以及次日晨痰標本,涂片后用金胺O染色,LED熒光顯微鏡鏡檢。研究表明盡管LED熒光顯微鏡鏡檢法對于菌量少的標本檢出敏感率更高,但其對同一天的痰標本檢測可造成8%的涂片陽性率的流失。因此研究者建議應謹慎對待WHO推薦的僅在就診當天留取痰標本的新政策。
2.肺外標本的檢測
中國學者Huang等 [3]評估了MODS法對中國人群中肺外結核患者標本檢測。樣本包括胸腔積液(N=112)和腦脊液(N=61),檢測結果顯示MODS對兩類標本檢測的靈敏度分別為20.5%、37.5%,特異度近似100%。培養的中位數時間分別為14、9天。研究者認為與L-J培養相比,MODS法大大縮短了報告時間,在資源有限的國家和地區開展此類標本檢測對提高肺外結核的診斷有顯著幫助。張繼萍等 [4]為探討纖維支氣管鏡肺泡灌洗液改良抗酸染色法對痰菌陰性肺結核患者的診斷價值,對50例痰菌陰性肺結核患者進行纖維支氣管鏡肺泡灌洗,應用傳統、改良兩種抗酸染色法對灌洗液進行檢測,得到兩種方法對肺結核診斷的陽性率分別為38%和82%。研究者認為改良抗酸染色法大大提高了痰菌陰性肺結核患者的陽性診斷率,值得臨床推廣應用。
3.新技術與涂片鏡檢的聯合應用
傳統抗酸染色的痰涂片鏡檢法的檢出界限為每毫升痰液標本中含菌量最低10 4個菌,盡管熒光染料如金胺O等能夠提高其檢出率,但培養陽性的痰標本仍有一半以上涂片檢測結果為陰性。Ryan等 [5]評價了新型的與核酸結合的熒光染料SYBR? Gold對體外培養的Mtb涂片鏡檢的方法。能夠檢測出有氧狀態下及厭氧狀態下培養的99%的Mtb,而常規金胺O,金胺-若丹明染色檢出率在54%~86%范圍內。盡管SYBR? Gold由于成本和穩定性的原因,目前尚無法在臨床標本中檢測應用,但隨著相關研究的展開,未來仍有希望被應用于臨床。美國學者McCall等 [6]將新型微型物鏡與數字化熒光涂片鏡檢技術相結合,評價其與標準的熒光痰涂片鏡檢。研究證明兩者有著較高的一致性,前者的敏感性和特異性分別為100%、95%。
(二)分離培養和鑒定
李輝等 [7]綜述了液體培養法在結核病及耐藥結核病診斷中的應用,強調了其中實驗室質量控制的重要性。提出應參照國家結核病參比實驗室參照WHO 推薦的方法對Mtb培養制定的質量控制程序而編寫的《分枝桿菌分離培養標準化操作程序及質量保證手冊》,對于常規結核病實驗室培養的質量控制有兩個參考指標,一定時期內的污染率和涂陽培陰率,培養污染率應控制在2%~5%;針對初治結核病患者的涂陽培陰率應控制在10%內。若培養污染率小于2%,表明該實驗室在分離培養前期去污染過程分枝桿菌被殺滅太多,存在過度處理的問題;若污染率大于5%,又表明去污染不充分雜菌沒有被殺滅,前處理不夠。但通常液體培養污染率要高于固體培養,對于液體培養更加要防止操作過程的污染。涂陽培陰率若高于10%,則表明該實驗室涂片顯微鏡檢查質量有問題或培養技術達不到要求。泰國Phunpae等 [8]介紹了一種通過培養法快速鑒定Mtb的方法,利用酶聯免疫吸附測定(ELISA)在臨床標本液體培養的濾液中檢測Mtb分泌抗原Ag85。該方法與標準培養鑒定相比敏感性為89.6%,特異性為94%。使用該方法可最早在第3天檢測到,第3天、第1周、第2周和第4周分別診斷出了25%、50%、80%和90%的TB患者。