莪術油的活性成分為倍半萜烯類等物質，如莪術酮、莪術醇、欖香烯等。王琰等用硅膠柱層析的方法從溫莪術中分離提取得到7種單體化合物，經熔點、紫外、紅外、質譜、磁共振等方法測定，分別確證為姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素、莪術醇、莪術二酮、異莪術烯醇和吉馬酮。通過X單晶衍射測定出姜黃素、莪術醇、異莪術烯醇和吉馬酮的化學結構式，且通過TLC、HPLC方法檢查到純度均在98%以上。通過藥效學試驗及對三種不同品種及產地的莪術中的這七種成分含量比較，提示可將揮發油作為有效部位，姜黃素作為莪術的有效成分，吉馬酮作為指標性成分，一并控制莪術質量。

目前，國內外還認為建立在中藥成分系統研究基礎上的指紋圖譜對于中藥內在質量評價和控制可以保障中藥質量的測控，全面反映所含特征成分的指紋標準的建立，將更有效地進行中藥的質量評價和控制。謝瑩等用毛細管氣相色譜法對莪術油的氣相色譜指紋的標準化和數字化進行研究，考察利用系列正構烷烴為參比，在不同色譜條件下進行氣相指紋譜的測定，結果表明，用多參比指標建立的指紋圖譜數字化標準對中藥質量控制更科學有效。

國內文獻報道，主要以莪術油中的莪術醇和欖香烯的含量為依據，制定質量標準。

莪術醇是莪術油中的有效成分之一，可作為莪術油真偽鑒別的依據。莪術醇為倍半萜類化合物，具有半縮酮結構，其熔點為147～142℃，比旋度［α］為40.8°，折光率n ²⁵為1.482。《中國藥典》1995年版采用薄層層析鑒定莪術醇，即在硅膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯（90∶10）傾斜上行展開，用1%香草醛硫酸溶液噴霧顯色。有文獻報道在硅膠G薄層板上以石油醚-乙酸乙酯（85∶15）展開，香草醛硫酸溶液噴霧顯色。此外，亦有文獻報道在硅膠G薄層板上以己烷和乙烷-乙酸乙酯（85∶15）為展開劑，用10%磷鉬酸顯色。《中國藥典》2010年版一部采用薄層色譜法，以硅膠G板為色譜板，石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-冰醋酸（60∶5∶0.5）為展開劑，用莪術醇、牻牛兒酮和莪術二酮為對照品進行鑒別，以5%香草醛硫酸溶液顯色，在105℃加熱至斑點顯色清晰，結果發現斑點分離較好，斑點清晰可見。

我國現有的莪術醇定量測定方法有以下幾種：

1.分光光度法該法為《中國藥典》1995年版推薦方法，為莪術醇與香草醛硫酸溶液反應，在20～25℃放置1小時，在520nm波長處用分光光度法測定吸收度，并以聚山梨酯乙醇溶液作空白對照得到測定值。但這種方法特異性不強，易受多種因素影響如水分等，同時，莪術醇與揮發油中其他成分沒有分離，難免對測量值產生干擾，使結果不太穩定。

2.紅外分光光度法在硅膠G板上，以石油醚-丙酮（96∶4）為展開劑，將揮發油中極性較小的干擾組分層析至高 R _f值區，而將莪術醇留在原點附近，然后無須顯色標記出其斑點位置，而根據試驗中求出 R _f值，直接將薄層上莪術醇部分刮下洗脫，再以其紅外光譜中亞乙基吸收峰為定量譜帶，CCl ₄為溶劑，基線法測定吸光度，結合標準曲線定量。此法中亞乙基的譜帶專屬性強，除干擾組分外，其他組分與莪術醇無須進行分離。

3.薄層掃描法李靜坤在硅膠G-CMC上，石油醚-乙酸乙酯（95∶5）傾斜上行展開，使莪術醇與其他成分分離，立即揮散溶劑后，用香草醛冰草酸醋酸顯色，100℃下干燥，莪術醇為紫紅色斑點，顯色后1小時用λ _S＝575nm，λ _R＝730nm雙波長薄層掃描儀測定吸收度積分值。由于莪術醇在酸中性質穩定，應在顯色后2小時內進行掃描。以硅膠G薄層板為固定相，石油乙醚（30～60℃）-丙酮-乙酸乙酯（94∶5∶1）為展開劑，10%硫酸乙醇溶液為顯色劑，60℃顯色4分鐘，以反射式鋸齒掃描測得溫莪術油中莪術醇的平均含量為7.45%。

4.氣相色譜法鑒于揮發油組分復雜，內標物選擇困難，顧民心采用外標法測定莪術醇含量。選用的色譜條件為：固定相2%OV-17，柱長2m，柱溫156℃，汽化室溫度200℃，氫火焰離子檢測，載氣流量（ml/min）：氮35，氫54，空氣400。鄭少珠以聯苯和氧雜蔥為內標物，采用色譜條件為3.2mm×2m玻璃填充柱，柱溫155℃，汽化室及檢測器溫度220℃，載氣流量（ml/min）：氮氣50，氫氣50，空氣500，測定莪術油原料藥莪術醇的含量。

Zhu等利用氣相色譜法來測定莪術中莪術醇的含量。用高效毛細管氣相色譜法定量測定姜黃屬的4種中藥材溫郁金、姜黃、蓬莪術、廣西莪術中莪術醇含量，結果表明用高效毛細管氣相色譜程序升溫法分離姜黃屬植物根莖揮發油結果較為理想。

5.液相色譜法游劍等在莪術油微球的含量測定中，利用香草醛濃硫酸溶液顯色，以莪術醇為對照，通過醇油系數κ從而計算出微球中總油的含量。運用二極管陣列檢測器同時分析制劑中莪術油3種指標性成分含量：莪術醇、莪術二酮、吉馬酮，從UV掃描結果分析及排除測定溶劑的干擾，最終選定莪術醇、吉馬酮、莪術二醇測定波長分別為204nm、245nm、227nm。

王婷等報道紫外-可見分光光度法是根據莪術醇與香草醛濃硫酸反應后的物質來測量，顯色反應的溫度和時間難以控制，且香草醛濃硫酸試劑本身不穩定，需臨時配制，準確度和精密度都難以保證。其采用高效液相色譜法測定莪術醇的含量，色譜柱為C18液相色譜柱（ODS柱），以乙腈-水（15∶85，V∶V）為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為210nm，柱溫為25℃；以外標兩點法計算含量。該法簡便、準確、快速，可用于莪術醇及其制劑的質量控制。

魏福祥等以SE-30毛細管色譜柱為分析柱，正十六烷為內標物質，采用程序升溫氣相色譜法，起始溫度160℃，保持7分鐘，然后以20℃/min速率升溫至240℃，保持15分鐘，氮氣流量1.9ml/min，分流體積比為1∶30，汽化室及檢測室溫度240℃，測定莪術揮發油中欖香烯的含量，該方法簡便、快速，測定結果準確、可靠。

楊威采用內標法，以水楊酸甲酯作為內標物，通過毛細管氣相色譜法測定莪術油中β-欖香烯含量。采用OV　1701為固定相、柱長25m、內徑0.2mm、液膜厚度0.25μm的毛細管色譜柱；程序升溫：起始溫度100℃，5℃/min，結束溫度200℃，載氣為氮氣，流速1.5ml/min。氫火焰離子化檢測器。結果β-欖香烯進樣量在0.715～14.300ng內與峰面積比值（β-欖香烯/水楊酸甲酯）呈良好的線性關系， r＝0.9999，平均回收率100.4%（ RSD＝0.58%）。提示毛細管氣相色譜法可作為莪術油中β-欖香烯的含量測定方法。

杜霞采用HP-5MS色譜柱（30m×0.25mm×0.25μm），初始溫度100℃，然后以10℃/min升溫至220℃，汽化室溫度250℃，載氣氮氣流量1ml/min，進樣量1μl，不分流進樣。用GC-MS對溫莪術和廣西莪術莪術油中β-欖香烯的含量進行比較，結果表明溫莪術的莪術油中β-欖香烯的含量明顯高于廣西莪術。

在薄層色譜法中選擇莪術油中量較高的倍半烯萜類成分呋喃二烯、牻牛兒酮和莪術二酮作為莪術油的指標成分，更能體現莪術油的質量。從莪術油組成成分性質差異大的角度考慮，由于莪術二酮的極性較大，呋喃二烯極性較小，牻牛兒酮的極性居中，選用呋喃二烯、牻牛兒酮和莪術二酮作為薄層鑒別法的指標成分，可根據3個不同性質的化學指標展示莪術油薄層色譜圖的特征并標示主要成分的位置，綜合評價莪術油整體的穩定性情況，使鑒定的可靠性更有保證，使評價結果更客觀真實。

《中國藥典》2005年版一部規定莪術油的含量測定方法為高效液相色譜法，以氰基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-水（35∶65）為流動相進行洗脫，以牻牛兒酮為對照品，檢測波長為210nm進行含量測定。劉慧俊以莪術油有效成分蓬莪術環二烯、牻牛兒酮和莪術二酮同時作為指標成分，采用Kromasil KRIOO-5C18色譜柱，柱溫為25℃，流動相為甲醇-水（90∶10），測波長為215nm。結果蓬莪術環二烯、牻牛兒酮和莪術二酮分別在24.12～120.60μg/ml、8.30～41.52μg/ml和24.62～123.12μg/ml范圍內線性關系良好，平均回收率分別為97.45%、99.26%和96.71%，RSD分別為2.43%、2.71%和1.88%，即加樣回收率良好。莪術油的抗癌、抗病毒物質基礎是倍半萜類成分，主要包括蓬莪術環二烯、牻牛兒酮和莪術二酮，三者含量約占莪術油的42%～50%。試驗表明采用蓬莪術環二烯、牻牛兒酮和莪術二酮同時作為指標成分，代替原來的單一指標成分，能更好地控制莪術油的內在質量，確保其臨床療效，減少副作用。

《中國藥典》2010年版一部規定莪術油的含量測定方法為高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈和水為流動相進行梯度洗脫，以牻牛兒酮和呋喃二烯為對照品，檢測波長為216nm進行含量測定。

莪術二酮的含量測定：李成網等用高效液相色譜法測定莪術油中莪術二酮的含量。采用K romasil CN柱（150mm× 416mm），乙腈-水（32∶68）為流動相，檢測波長為220nm。該法簡便、快速、重復性好，可作為莪術油及其制劑的定量分析方法。

賈東明等用反相-高效液相色譜法（RP-HPLC）測定莪術油凝膠劑中吉馬酮的含量，方法是在ODS-C18色譜柱上采用流動相乙睛-0.025mol/L磷酸（45∶55）（三乙胺調節pH至4.5）溶液進行梯度洗脫，乙腈（70%）：0～5分鐘；乙腈（70%→90%）：5～30分鐘；乙腈（90%）：30～50分鐘。檢測波長213nm，流速為1.0ml/min。本法專屬性高，可同時測定凝膠劑樣品中莪術醇和吉馬酮的含量，可用于對莪術油凝膠劑的質量控制。楊威等以毛細管氣相色譜法測定莪術油中吉瑪酮和β-欖香烯含量。以水楊酸甲酯為內標物，采用OV-1701為固定液，柱長25m、內徑0.2mm、液膜厚度0.25μm的毛細管色譜柱；程序升溫：起始溫度100℃，5℃/min，結束溫度200℃；載氣為氮氣；流速115ml/min；氫火焰離子化檢測器。

指紋圖譜一般是指某些中藥材或中藥制劑經過適當處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標識其化學特征的色譜圖或光譜圖。指紋圖譜主要是通過現代的分析檢測手段對復雜物質體系特征的一種闡釋。近十幾年來，世界主要的中藥、天然藥物強國或組織均采用指紋圖譜的方法來檢測中藥或天然藥物的整體化合物特征，包括日本、法國、德國、中國、英國、印度、世界衛生組織（WHO）等。近十年來，莪術油的指紋圖譜研究也取得了長足的進步，不僅包括GC指紋圖譜、GC-MS指紋圖譜、HPLC指紋圖譜，而且GC-QTOF-MS指紋圖譜的研究也取得了較大的進展。

彭纓采用高效液相色譜/電噴霧-四極桿-飛行時間質譜法測定莪術油化學成分。液相色譜-質譜聯用儀為Agilent　1100系列液相色譜系統和布魯克microTOFQ質譜檢測器。液相色譜和質譜條件如下：

液相條件：色譜柱：GRACE Alltima ^TMC18（250mm×4.6mm，5μm）；

流動相：乙腈-0.1%甲酸水；檢測波長：214nm；

進樣量：5μl；流速：0.9ml/min；柱溫：25℃；

梯度洗脫程序：

質譜條件：ESI源：正離子檢測模式；End Plate offset：-500V；

毛細管電壓：-4500V；霧化氣壓力：120kPa；干燥氣：N ₂；

干燥氣流速：8.0L/min；干燥氣溫度：180℃；

精密稱取莪術油適量，甲醇溶解并配制成相當于莪術油濃度為10μg/ml的溶液，按液相色譜與質譜條件下所得的莪術油總離子流色譜圖（圖1-4-1）進行分析。

通過保留時間結合文獻并比對所建數據庫，對莪術油和莪術水煎液中的色譜峰進行鑒別。以莪術油中bisacurone epoxide的鑒別為例說明莪術中色譜峰的鑒別過程。利用布魯克“Bruker Daltonics Data Analysis”軟件，對數據庫中所有化學成分進行萃取，若能得到萃取離子流色譜圖，則可能包含此種化學成分。bisacurone epoxide的準分子離子峰M＋H峰和M＋Na峰的精確相對分子量分別269.1747和291.1567，M＋Na峰的萃取離子流圖如圖1-4-2。在“Generate Molecular Formula”軟件中輸入bisacurone epoxide的分子式C ₁₅H ₂₄O ₄Na，計算精確分子質量和真實放射性核素分布并與實際情況進行比對，計算得到質量測量誤差為-0.5ppm，sigma值為0.0969，確定此峰為bisacurone epoxide。同理可得莪術油中bisacurone epoxide、4-methoxy-5-hydroxy-bisabola-2，10-diene-9-one、acetoxyneocurdione、zedoarolide A、trans，trans-1，7-diphenyl-l，3-heptadien-5-zedoalactone A、ar-turmerone、curcumenol、zedoalactone B、crucumalactone的解析過程。試驗中采用莪術二酮、呋喃二烯、莪術醇為對照品，準確鑒定出莪術油中的莪術二酮和莪術醇，混合對照品的總離子流圖如圖1-4-3，峰1為莪術二酮，峰2為莪術醇。通過以上數據處理過程共鑒定出莪術油中的15種化學成分，鑒定結果列于表1-4-1。

祝明等建立莪術油的HPLC指紋圖譜鑒別方法。使用Agilent　1200系列高效液相色譜儀，色譜條件如下：

色譜柱：Agilent Extend C18（250mm×4.6mm，5μm）；進樣量：5μl；

流動相：乙腈-水；流速：1.0ml/min；檢測波長：216nm；柱溫：30℃；

梯度洗脫：

精密稱取呋喃二烯對照品適量，加無水乙醇制成80μg/ml的溶液作為參照物；精密稱取莪術油0.1g于50ml量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml至25ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻離心，取上清液作為供試品溶液。方法學考察結果表明本方法精密度、穩定性、重復性均符合要求，適合作為指紋圖譜檢測方法。

試驗采用浙江天瑞藥業有限公司和達州市天然植物藥業有限公司2家企業提供的22批莪術油樣品進行HPLC分析，生成莪術油對照指紋圖譜，見圖1-4-4。結果各批次供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜相似，呈現8個共有峰；供試品指紋圖譜中與參照物呋喃二烯色譜峰相應的峰為S峰，8個共有峰的相對保留時間分別為：0.374（1）、0.408（2）、0.568（3）、0.687（4）、0.975（5）、1.000（S）、1.296（7）、1.359（8），其RSD不得超過±10%；非共有峰峰面積不得超過總峰面積的10%。采用國家藥典委員會提供的中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統進行計算，樣品的指紋圖譜與莪術油對照指紋圖譜比較，相似度不得低于0.95。

取各批次樣品，制備供試品溶液，進樣測定，進行分析評價。結果22批樣品的主要色譜峰整體圖貌基本一致，相似度均大于0.990，共有峰相對保留時間的RSD小于1%，以浙江天瑞藥業有限公司提供的10批樣品測定結果為例，見表1-4-2、1-4-3、1-4-4、1-4-5和圖1-4-5。

周欣等選用GC-MS聯用技術對溫莪術油進行指紋圖譜測定。試驗采用HP6890-HP5973GC-MS聯用儀，色譜條件如下：

色譜柱：HP-5MS（30m×0.25mm，0.25μm）彈性石英毛細管柱；

柱溫：60℃，以10℃/min升溫至100℃，再以4℃/min升溫至200℃后，以20℃/min升溫至280℃，保持2分鐘；

汽化室溫度：250℃；載氣：高純度氦氣（純度為99.999%）；

柱前壓：52.6kPa；載氣流量：1.0ml/min；進樣量：1μl；分流比：40∶1；

離子源：EI源；離子源溫度：230℃；四極桿溫度：150℃；

電子能量：70eV；發射電流：34.6μA；接口溫度：280℃；

溶劑延遲：4min；質量范圍：10～550。

試驗采用水蒸氣蒸餾法提取溫莪術揮發油，按上述條件測定，方法學考察結果表明本方法精密度、穩定性、重復性均符合要求，適合作為指紋圖譜檢測方法。

以浙江瑞安產的溫莪術為研究對象，對其10批次藥材的揮發性成分進行測定，10個批次溫莪術油的GC-MS的TIC見圖1-4-6。有21個主要的共有特征峰（占總峰面積94%以上），選擇8號峰為參照峰，然后分別求出各特征峰的調整保留時間之比（A值）和相對峰面積（峰面積之比），結果見表1-4-6。采用冰片和莪術醇的對照品進行對照。從溫莪術揮發油的質譜分析結果可知，A值為1.00時，組分是β-欖香烯（β-elemene），該成分是莪術油中具有抗腫瘤作用的活性成分。單峰面積占總峰面積大于20%的共有峰只有1個，就是A值為1.15的組分，質譜檢索結果是莪術烯（curzerene）；單峰面積占總峰面積大于10%的共有峰有2個，一個是A值為1.41時的組分，是吉馬酮，另一個是A值為1.43時的組分，是新莪術二酮（neocurdione）；A值為1.31時組分是莪術醇（curcumol），該組分相對峰面積變化較大，但該組分是單峰面積占總峰面積小于10%的共有峰，在《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術要求》（暫行）中，單峰面積占總峰面積小于10%的共有峰，峰面積比值不作要求。

采用國家食品藥品監督管理總局推薦的“中藥指紋圖譜計算機輔助相似度計算軟件”對測定結果進行計算，得到溫莪術（浙江瑞安產）揮發性成分的共有指紋圖譜，見圖1-4-7。對照共有指紋圖譜，10個批次溫莪術油的相似性分析結果見表1-4-7。

從此結果可以看出，10批次溫莪術揮發油樣本的相似度均在90%以上，未發現離群樣本，符合國家食品藥品監督管理總局對中藥指紋圖譜相似度的要求。

李想等采用毛細管氣相色譜法對莪術油進行指紋圖譜鑒定。試驗采用Agilent　6890N氣相色譜儀，色譜條件如下：

色譜柱：石英彈性毛細管HP-5（30m×0.32mm）WCOT柱；

固定相：5%苯基甲聚硅氧烷；

程序升溫：柱初始溫度為100℃，保持5分鐘后以7℃/min升至130℃，在130℃保持15分鐘，然后以5℃/min升至140℃，在140℃保持10分鐘，最后以4℃/min升至220℃；

氫火焰檢測器（FID）：280℃；汽化室溫度：250℃；

載氣：高純度氮（純度＞99.999%）；前柱壓：42kPa；

載氣流速：1ml/min；進樣量：1μl；分流比：2.5∶1。

稱取莪術油樣品約0.1g，置于10ml量瓶中，甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻得供試品溶液。方法學考察結果表明本方法精密度、穩定性、重復性均符合要求，適合作為指紋圖譜檢測方法。

取不同批次的莪術油樣品進樣分析，樣品的出峰總數及其特征峰所占的比例見表1-4-8。

以17批莪術油為研究對象，對其成分進行測定，有16個主要的共有特征峰（占總峰面積90%以上），選擇8號峰（莪術烯）為參照峰進行計算，所得結果進行SPSS聚類分析，結果見圖1-4-8。從聚類結果中可以看出：第1～12批（除第3批外）聚為一類；第13～17批聚為一類；而第3批樣品則較為分散（即所含成分差異較大），無法成為一類。

由于GC色譜工作站獲得的數據與國家藥典委員會提供的指紋圖譜相似度軟件不兼容，所以本試驗采用Excel計算指紋圖譜的相似度。17批次莪術油的相似性分析結果見表1-4-9、1-4-10。計算結果：17批樣品相關系數分別為0.5198～0.8695（均值）和0.2743～0.9886（中位數），夾角余弦分別為0.6459～0.9212（均值）和0.5015～0.9884（中位數），表明17批樣品的相似度低，無法建立莪術油的共有指紋圖譜。通過聚類分析結果可將莪術油分為兩類，自制莪術油和市售莪術油各為一類，但遼寧莪術油的差異較大，無法成為一類。因此基于聚類分析結果，分別建立了自制莪術油和市售莪術油的指紋圖譜的共有模式，并分別具有較高的相似度：第1～12批（除第3、9批外），相關系數分別為0.8869～0.9950（均值）和0.8490～0.9980（中位數），夾角余弦分別為0.9101～0.9952（均值）和0.8770～0.9979（中位數），第13～17批樣品，相關系數分別為0.9547～0.9978（均值）和0.9280～0.9978（中位數），夾角余弦分別為0.9667～0.9982（均值）和0.9477～0.9978（中位數）。結果表明：可以分別建立自制莪術油和市售莪術油的指紋圖譜的共有模式，結果見圖1-4-9。

本試驗對中藥莪術油的指紋圖譜進行研究，由圖譜可知：實驗室自制莪術油的β-欖香烯和莪術二酮含量低，其中溫莪術較高，蓬莪術次之，廣西莪術含量最低。而市售莪術油的藥材品種為溫莪術，β-欖香烯和莪術二酮的含量高。研究結果表明：自制莪術油和市售莪術油不具有共同的指紋圖譜模式。

彭纓等還對廣西莪術水煎液化學成分進行分析，采用對莪術油分析相同的液相色譜、質譜條件和分析方法，所得廣西莪術水煎液總離子流色譜圖和化學成分鑒定見圖1-4-10和表1-4-11。化合物curcolone、zedoarol、zederone分子式均為C ₁₅ H ₁₈O ₃，采用ACD/Chemdraw軟件計算化合物的親水親油平衡值log P分別為1.59、1.66、1.5，log P值越大，疏水性越強，根據化合物在反相色譜的保留原則，疏水性越強，出峰越晚，結合保留時間可判斷出峰順序為zederone＞curcolone＞zedoarol。

從莪術油和莪術水煎液的HPLC-QTOF/MS結果分析，兩者共有成分有5種，分別為bisacurone epoxide、莪術二酮、l，7-bis-（4-hydroxyphenyl）-l，4，6-heptatrien-3-one、zederone、curcumenol。試驗結果表明莪術油與莪術水煎液中的化學成分差異很大，莪術傳統水煎液的藥效物質基礎與莪術油存在很大差別。在莪術水煎液中沒有檢測到莪術醇、新莪術二酮、β-欖香烯等莪術油中的藥理活性物質。