莪術(shù)油的活性成分為倍半萜烯類等物質(zhì)，如莪術(shù)酮、莪術(shù)醇、欖香烯等。王琰等用硅膠柱層析的方法從溫莪術(shù)中分離提取得到7種單體化合物，經(jīng)熔點(diǎn)、紫外、紅外、質(zhì)譜、磁共振等方法測定，分別確證為姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素、莪術(shù)醇、莪術(shù)二酮、異莪術(shù)烯醇和吉馬酮。通過X單晶衍射測定出姜黃素、莪術(shù)醇、異莪術(shù)烯醇和吉馬酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)式，且通過TLC、HPLC方法檢查到純度均在98%以上。通過藥效學(xué)試驗(yàn)及對三種不同品種及產(chǎn)地的莪術(shù)中的這七種成分含量比較，提示可將揮發(fā)油作為有效部位，姜黃素作為莪術(shù)的有效成分，吉馬酮作為指標(biāo)性成分，一并控制莪術(shù)質(zhì)量。

目前，國內(nèi)外還認(rèn)為建立在中藥成分系統(tǒng)研究基礎(chǔ)上的指紋圖譜對于中藥內(nèi)在質(zhì)量評價(jià)和控制可以保障中藥質(zhì)量的測控，全面反映所含特征成分的指紋標(biāo)準(zhǔn)的建立，將更有效地進(jìn)行中藥的質(zhì)量評價(jià)和控制。謝瑩等用毛細(xì)管氣相色譜法對莪術(shù)油的氣相色譜指紋的標(biāo)準(zhǔn)化和數(shù)字化進(jìn)行研究，考察利用系列正構(gòu)烷烴為參比，在不同色譜條件下進(jìn)行氣相指紋譜的測定，結(jié)果表明，用多參比指標(biāo)建立的指紋圖譜數(shù)字化標(biāo)準(zhǔn)對中藥質(zhì)量控制更科學(xué)有效。

國內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道，主要以莪術(shù)油中的莪術(shù)醇和欖香烯的含量為依據(jù)，制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

莪術(shù)醇是莪術(shù)油中的有效成分之一，可作為莪術(shù)油真?zhèn)舞b別的依據(jù)。莪術(shù)醇為倍半萜類化合物，具有半縮酮結(jié)構(gòu)，其熔點(diǎn)為147～142℃，比旋度［α］為40.8°，折光率n ²⁵為1.482。《中國藥典》1995年版采用薄層層析鑒定莪術(shù)醇，即在硅膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯（90∶10）傾斜上行展開，用1%香草醛硫酸溶液噴霧顯色。有文獻(xiàn)報(bào)道在硅膠G薄層板上以石油醚-乙酸乙酯（85∶15）展開，香草醛硫酸溶液噴霧顯色。此外，亦有文獻(xiàn)報(bào)道在硅膠G薄層板上以己烷和乙烷-乙酸乙酯（85∶15）為展開劑，用10%磷鉬酸顯色?！吨袊幍洹?010年版一部采用薄層色譜法，以硅膠G板為色譜板，石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-冰醋酸（60∶5∶0.5）為展開劑，用莪術(shù)醇、牻牛兒酮和莪術(shù)二酮為對照品進(jìn)行鑒別，以5%香草醛硫酸溶液顯色，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，結(jié)果發(fā)現(xiàn)斑點(diǎn)分離較好，斑點(diǎn)清晰可見。

我國現(xiàn)有的莪術(shù)醇定量測定方法有以下幾種：

1.分光光度法該法為《中國藥典》1995年版推薦方法，為莪術(shù)醇與香草醛硫酸溶液反應(yīng)，在20～25℃放置1小時(shí)，在520nm波長處用分光光度法測定吸收度，并以聚山梨酯乙醇溶液作空白對照得到測定值。但這種方法特異性不強(qiáng)，易受多種因素影響如水分等，同時(shí)，莪術(shù)醇與揮發(fā)油中其他成分沒有分離，難免對測量值產(chǎn)生干擾，使結(jié)果不太穩(wěn)定。

2.紅外分光光度法在硅膠G板上，以石油醚-丙酮（96∶4）為展開劑，將揮發(fā)油中極性較小的干擾組分層析至高 R _f值區(qū)，而將莪術(shù)醇留在原點(diǎn)附近，然后無須顯色標(biāo)記出其斑點(diǎn)位置，而根據(jù)試驗(yàn)中求出 R _f值，直接將薄層上莪術(shù)醇部分刮下洗脫，再以其紅外光譜中亞乙基吸收峰為定量譜帶，CCl ₄為溶劑，基線法測定吸光度，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。此法中亞乙基的譜帶專屬性強(qiáng)，除干擾組分外，其他組分與莪術(shù)醇無須進(jìn)行分離。

3.薄層掃描法李靜坤在硅膠G-CMC上，石油醚-乙酸乙酯（95∶5）傾斜上行展開，使莪術(shù)醇與其他成分分離，立即揮散溶劑后，用香草醛冰草酸醋酸顯色，100℃下干燥，莪術(shù)醇為紫紅色斑點(diǎn)，顯色后1小時(shí)用λ _S＝575nm，λ _R＝730nm雙波長薄層掃描儀測定吸收度積分值。由于莪術(shù)醇在酸中性質(zhì)穩(wěn)定，應(yīng)在顯色后2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行掃描。以硅膠G薄層板為固定相，石油乙醚（30～60℃）-丙酮-乙酸乙酯（94∶5∶1）為展開劑，10%硫酸乙醇溶液為顯色劑，60℃顯色4分鐘，以反射式鋸齒掃描測得溫莪術(shù)油中莪術(shù)醇的平均含量為7.45%。

4.氣相色譜法鑒于揮發(fā)油組分復(fù)雜，內(nèi)標(biāo)物選擇困難，顧民心采用外標(biāo)法測定莪術(shù)醇含量。選用的色譜條件為：固定相2%OV-17，柱長2m，柱溫156℃，汽化室溫度200℃，氫火焰離子檢測，載氣流量（ml/min）：氮35，氫54，空氣400。鄭少珠以聯(lián)苯和氧雜蔥為內(nèi)標(biāo)物，采用色譜條件為3.2mm×2m玻璃填充柱，柱溫155℃，汽化室及檢測器溫度220℃，載氣流量（ml/min）：氮?dú)?0，氫氣50，空氣500，測定莪術(shù)油原料藥莪術(shù)醇的含量。

Zhu等利用氣相色譜法來測定莪術(shù)中莪術(shù)醇的含量。用高效毛細(xì)管氣相色譜法定量測定姜黃屬的4種中藥材溫郁金、姜黃、蓬莪術(shù)、廣西莪術(shù)中莪術(shù)醇含量，結(jié)果表明用高效毛細(xì)管氣相色譜程序升溫法分離姜黃屬植物根莖揮發(fā)油結(jié)果較為理想。

5.液相色譜法游劍等在莪術(shù)油微球的含量測定中，利用香草醛濃硫酸溶液顯色，以莪術(shù)醇為對照，通過醇油系數(shù)κ從而計(jì)算出微球中總油的含量。運(yùn)用二極管陣列檢測器同時(shí)分析制劑中莪術(shù)油3種指標(biāo)性成分含量：莪術(shù)醇、莪術(shù)二酮、吉馬酮，從UV掃描結(jié)果分析及排除測定溶劑的干擾，最終選定莪術(shù)醇、吉馬酮、莪術(shù)二醇測定波長分別為204nm、245nm、227nm。

王婷等報(bào)道紫外-可見分光光度法是根據(jù)莪術(shù)醇與香草醛濃硫酸反應(yīng)后的物質(zhì)來測量，顯色反應(yīng)的溫度和時(shí)間難以控制，且香草醛濃硫酸試劑本身不穩(wěn)定，需臨時(shí)配制，準(zhǔn)確度和精密度都難以保證。其采用高效液相色譜法測定莪術(shù)醇的含量，色譜柱為C18液相色譜柱（ODS柱），以乙腈-水（15∶85，V∶V）為流動(dòng)相，流速為1.0ml/min，檢測波長為210nm，柱溫為25℃；以外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量。該法簡便、準(zhǔn)確、快速，可用于莪術(shù)醇及其制劑的質(zhì)量控制。

魏福祥等以SE-30毛細(xì)管色譜柱為分析柱，正十六烷為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，采用程序升溫氣相色譜法，起始溫度160℃，保持7分鐘，然后以20℃/min速率升溫至240℃，保持15分鐘，氮?dú)饬髁?.9ml/min，分流體積比為1∶30，汽化室及檢測室溫度240℃，測定莪術(shù)揮發(fā)油中欖香烯的含量，該方法簡便、快速，測定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

楊威采用內(nèi)標(biāo)法，以水楊酸甲酯作為內(nèi)標(biāo)物，通過毛細(xì)管氣相色譜法測定莪術(shù)油中β-欖香烯含量。采用OV　1701為固定相、柱長25m、內(nèi)徑0.2mm、液膜厚度0.25μm的毛細(xì)管色譜柱；程序升溫：起始溫度100℃，5℃/min，結(jié)束溫度200℃，載氣為氮?dú)猓魉?.5ml/min。氫火焰離子化檢測器。結(jié)果β-欖香烯進(jìn)樣量在0.715～14.300ng內(nèi)與峰面積比值（β-欖香烯/水楊酸甲酯）呈良好的線性關(guān)系， r＝0.9999，平均回收率100.4%（ RSD＝0.58%）。提示毛細(xì)管氣相色譜法可作為莪術(shù)油中β-欖香烯的含量測定方法。

杜霞采用HP-5MS色譜柱（30m×0.25mm×0.25μm），初始溫度100℃，然后以10℃/min升溫至220℃，汽化室溫度250℃，載氣氮?dú)饬髁?ml/min，進(jìn)樣量1μl，不分流進(jìn)樣。用GC-MS對溫莪術(shù)和廣西莪術(shù)莪術(shù)油中β-欖香烯的含量進(jìn)行比較，結(jié)果表明溫莪術(shù)的莪術(shù)油中β-欖香烯的含量明顯高于廣西莪術(shù)。

在薄層色譜法中選擇莪術(shù)油中量較高的倍半烯萜類成分呋喃二烯、牻牛兒酮和莪術(shù)二酮作為莪術(shù)油的指標(biāo)成分，更能體現(xiàn)莪術(shù)油的質(zhì)量。從莪術(shù)油組成成分性質(zhì)差異大的角度考慮，由于莪術(shù)二酮的極性較大，呋喃二烯極性較小，牻牛兒酮的極性居中，選用呋喃二烯、牻牛兒酮和莪術(shù)二酮作為薄層鑒別法的指標(biāo)成分，可根據(jù)3個(gè)不同性質(zhì)的化學(xué)指標(biāo)展示莪術(shù)油薄層色譜圖的特征并標(biāo)示主要成分的位置，綜合評價(jià)莪術(shù)油整體的穩(wěn)定性情況，使鑒定的可靠性更有保證，使評價(jià)結(jié)果更客觀真實(shí)。

《中國藥典》2005年版一部規(guī)定莪術(shù)油的含量測定方法為高效液相色譜法，以氰基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-水（35∶65）為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，以牻牛兒酮為對照品，檢測波長為210nm進(jìn)行含量測定。劉慧俊以莪術(shù)油有效成分蓬莪術(shù)環(huán)二烯、牻牛兒酮和莪術(shù)二酮同時(shí)作為指標(biāo)成分，采用Kromasil KRIOO-5C18色譜柱，柱溫為25℃，流動(dòng)相為甲醇-水（90∶10），測波長為215nm。結(jié)果蓬莪術(shù)環(huán)二烯、牻牛兒酮和莪術(shù)二酮分別在24.12～120.60μg/ml、8.30～41.52μg/ml和24.62～123.12μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率分別為97.45%、99.26%和96.71%，RSD分別為2.43%、2.71%和1.88%，即加樣回收率良好。莪術(shù)油的抗癌、抗病毒物質(zhì)基礎(chǔ)是倍半萜類成分，主要包括蓬莪術(shù)環(huán)二烯、牻牛兒酮和莪術(shù)二酮，三者含量約占莪術(shù)油的42%～50%。試驗(yàn)表明采用蓬莪術(shù)環(huán)二烯、牻牛兒酮和莪術(shù)二酮同時(shí)作為指標(biāo)成分，代替原來的單一指標(biāo)成分，能更好地控制莪術(shù)油的內(nèi)在質(zhì)量，確保其臨床療效，減少副作用。

《中國藥典》2010年版一部規(guī)定莪術(shù)油的含量測定方法為高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈和水為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，以牻牛兒酮和呋喃二烯為對照品，檢測波長為216nm進(jìn)行含量測定。

莪術(shù)二酮的含量測定：李成網(wǎng)等用高效液相色譜法測定莪術(shù)油中莪術(shù)二酮的含量。采用K romasil CN柱（150mm× 416mm），乙腈-水（32∶68）為流動(dòng)相，檢測波長為220nm。該法簡便、快速、重復(fù)性好，可作為莪術(shù)油及其制劑的定量分析方法。

賈東明等用反相-高效液相色譜法（RP-HPLC）測定莪術(shù)油凝膠劑中吉馬酮的含量，方法是在ODS-C18色譜柱上采用流動(dòng)相乙睛-0.025mol/L磷酸（45∶55）（三乙胺調(diào)節(jié)pH至4.5）溶液進(jìn)行梯度洗脫，乙腈（70%）：0～5分鐘；乙腈（70%→90%）：5～30分鐘；乙腈（90%）：30～50分鐘。檢測波長213nm，流速為1.0ml/min。本法專屬性高，可同時(shí)測定凝膠劑樣品中莪術(shù)醇和吉馬酮的含量，可用于對莪術(shù)油凝膠劑的質(zhì)量控制。楊威等以毛細(xì)管氣相色譜法測定莪術(shù)油中吉瑪酮和β-欖香烯含量。以水楊酸甲酯為內(nèi)標(biāo)物，采用OV-1701為固定液，柱長25m、內(nèi)徑0.2mm、液膜厚度0.25μm的毛細(xì)管色譜柱；程序升溫：起始溫度100℃，5℃/min，結(jié)束溫度200℃；載氣為氮?dú)?；流?15ml/min；氫火焰離子化檢測器。

指紋圖譜一般是指某些中藥材或中藥制劑經(jīng)過適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標(biāo)識其化學(xué)特征的色譜圖或光譜圖。指紋圖譜主要是通過現(xiàn)代的分析檢測手段對復(fù)雜物質(zhì)體系特征的一種闡釋。近十幾年來，世界主要的中藥、天然藥物強(qiáng)國或組織均采用指紋圖譜的方法來檢測中藥或天然藥物的整體化合物特征，包括日本、法國、德國、中國、英國、印度、世界衛(wèi)生組織（WHO）等。近十年來，莪術(shù)油的指紋圖譜研究也取得了長足的進(jìn)步，不僅包括GC指紋圖譜、GC-MS指紋圖譜、HPLC指紋圖譜，而且GC-QTOF-MS指紋圖譜的研究也取得了較大的進(jìn)展。

彭纓采用高效液相色譜/電噴霧-四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜法測定莪術(shù)油化學(xué)成分。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀為Agilent　1100系列液相色譜系統(tǒng)和布魯克microTOFQ質(zhì)譜檢測器。液相色譜和質(zhì)譜條件如下：

液相條件：色譜柱：GRACE Alltima ^TMC18（250mm×4.6mm，5μm）；

流動(dòng)相：乙腈-0.1%甲酸水；檢測波長：214nm；

進(jìn)樣量：5μl；流速：0.9ml/min；柱溫：25℃；

梯度洗脫程序：

質(zhì)譜條件：ESI源：正離子檢測模式；End Plate offset：-500V；

毛細(xì)管電壓：-4500V；霧化氣壓力：120kPa；干燥氣：N ₂；

干燥氣流速：8.0L/min；干燥氣溫度：180℃；

精密稱取莪術(shù)油適量，甲醇溶解并配制成相當(dāng)于莪術(shù)油濃度為10μg/ml的溶液，按液相色譜與質(zhì)譜條件下所得的莪術(shù)油總離子流色譜圖（圖1-4-1）進(jìn)行分析。

通過保留時(shí)間結(jié)合文獻(xiàn)并比對所建數(shù)據(jù)庫，對莪術(shù)油和莪術(shù)水煎液中的色譜峰進(jìn)行鑒別。以莪術(shù)油中bisacurone epoxide的鑒別為例說明莪術(shù)中色譜峰的鑒別過程。利用布魯克“Bruker Daltonics Data Analysis”軟件，對數(shù)據(jù)庫中所有化學(xué)成分進(jìn)行萃取，若能得到萃取離子流色譜圖，則可能包含此種化學(xué)成分。bisacurone epoxide的準(zhǔn)分子離子峰M＋H峰和M＋Na峰的精確相對分子量分別269.1747和291.1567，M＋Na峰的萃取離子流圖如圖1-4-2。在“Generate Molecular Formula”軟件中輸入bisacurone epoxide的分子式C ₁₅H ₂₄O ₄Na，計(jì)算精確分子質(zhì)量和真實(shí)放射性核素分布并與實(shí)際情況進(jìn)行比對，計(jì)算得到質(zhì)量測量誤差為-0.5ppm，sigma值為0.0969，確定此峰為bisacurone epoxide。同理可得莪術(shù)油中bisacurone epoxide、4-methoxy-5-hydroxy-bisabola-2，10-diene-9-one、acetoxyneocurdione、zedoarolide A、trans，trans-1，7-diphenyl-l，3-heptadien-5-zedoalactone A、ar-turmerone、curcumenol、zedoalactone B、crucumalactone的解析過程。試驗(yàn)中采用莪術(shù)二酮、呋喃二烯、莪術(shù)醇為對照品，準(zhǔn)確鑒定出莪術(shù)油中的莪術(shù)二酮和莪術(shù)醇，混合對照品的總離子流圖如圖1-4-3，峰1為莪術(shù)二酮，峰2為莪術(shù)醇。通過以上數(shù)據(jù)處理過程共鑒定出莪術(shù)油中的15種化學(xué)成分，鑒定結(jié)果列于表1-4-1。

祝明等建立莪術(shù)油的HPLC指紋圖譜鑒別方法。使用Agilent　1200系列高效液相色譜儀，色譜條件如下：

色譜柱：Agilent Extend C18（250mm×4.6mm，5μm）；進(jìn)樣量：5μl；

流動(dòng)相：乙腈-水；流速：1.0ml/min；檢測波長：216nm；柱溫：30℃；

梯度洗脫：

精密稱取呋喃二烯對照品適量，加無水乙醇制成80μg/ml的溶液作為參照物；精密稱取莪術(shù)油0.1g于50ml量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml至25ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻離心，取上清液作為供試品溶液。方法學(xué)考察結(jié)果表明本方法精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性均符合要求，適合作為指紋圖譜檢測方法。

試驗(yàn)采用浙江天瑞藥業(yè)有限公司和達(dá)州市天然植物藥業(yè)有限公司2家企業(yè)提供的22批莪術(shù)油樣品進(jìn)行HPLC分析，生成莪術(shù)油對照指紋圖譜，見圖1-4-4。結(jié)果各批次供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜相似，呈現(xiàn)8個(gè)共有峰；供試品指紋圖譜中與參照物呋喃二烯色譜峰相應(yīng)的峰為S峰，8個(gè)共有峰的相對保留時(shí)間分別為：0.374（1）、0.408（2）、0.568（3）、0.687（4）、0.975（5）、1.000（S）、1.296（7）、1.359（8），其RSD不得超過±10%；非共有峰峰面積不得超過總峰面積的10%。采用國家藥典委員會(huì)提供的中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行計(jì)算，樣品的指紋圖譜與莪術(shù)油對照指紋圖譜比較，相似度不得低于0.95。

取各批次樣品，制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，進(jìn)行分析評價(jià)。結(jié)果22批樣品的主要色譜峰整體圖貌基本一致，相似度均大于0.990，共有峰相對保留時(shí)間的RSD小于1%，以浙江天瑞藥業(yè)有限公司提供的10批樣品測定結(jié)果為例，見表1-4-2、1-4-3、1-4-4、1-4-5和圖1-4-5。

周欣等選用GC-MS聯(lián)用技術(shù)對溫莪術(shù)油進(jìn)行指紋圖譜測定。試驗(yàn)采用HP6890-HP5973GC-MS聯(lián)用儀，色譜條件如下：

色譜柱：HP-5MS（30m×0.25mm，0.25μm）彈性石英毛細(xì)管柱；

柱溫：60℃，以10℃/min升溫至100℃，再以4℃/min升溫至200℃后，以20℃/min升溫至280℃，保持2分鐘；

汽化室溫度：250℃；載氣：高純度氦氣（純度為99.999%）；

柱前壓：52.6kPa；載氣流量：1.0ml/min；進(jìn)樣量：1μl；分流比：40∶1；

離子源：EI源；離子源溫度：230℃；四極桿溫度：150℃；

電子能量：70eV；發(fā)射電流：34.6μA；接口溫度：280℃；

溶劑延遲：4min；質(zhì)量范圍：10～550。

試驗(yàn)采用水蒸氣蒸餾法提取溫莪術(shù)揮發(fā)油，按上述條件測定，方法學(xué)考察結(jié)果表明本方法精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性均符合要求，適合作為指紋圖譜檢測方法。

以浙江瑞安產(chǎn)的溫莪術(shù)為研究對象，對其10批次藥材的揮發(fā)性成分進(jìn)行測定，10個(gè)批次溫莪術(shù)油的GC-MS的TIC見圖1-4-6。有21個(gè)主要的共有特征峰（占總峰面積94%以上），選擇8號峰為參照峰，然后分別求出各特征峰的調(diào)整保留時(shí)間之比（A值）和相對峰面積（峰面積之比），結(jié)果見表1-4-6。采用冰片和莪術(shù)醇的對照品進(jìn)行對照。從溫莪術(shù)揮發(fā)油的質(zhì)譜分析結(jié)果可知，A值為1.00時(shí)，組分是β-欖香烯（β-elemene），該成分是莪術(shù)油中具有抗腫瘤作用的活性成分。單峰面積占總峰面積大于20%的共有峰只有1個(gè)，就是A值為1.15的組分，質(zhì)譜檢索結(jié)果是莪術(shù)烯（curzerene）；單峰面積占總峰面積大于10%的共有峰有2個(gè)，一個(gè)是A值為1.41時(shí)的組分，是吉馬酮，另一個(gè)是A值為1.43時(shí)的組分，是新莪術(shù)二酮（neocurdione）；A值為1.31時(shí)組分是莪術(shù)醇（curcumol），該組分相對峰面積變化較大，但該組分是單峰面積占總峰面積小于10%的共有峰，在《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求》（暫行）中，單峰面積占總峰面積小于10%的共有峰，峰面積比值不作要求。

采用國家食品藥品監(jiān)督管理總局推薦的“中藥指紋圖譜計(jì)算機(jī)輔助相似度計(jì)算軟件”對測定結(jié)果進(jìn)行計(jì)算，得到溫莪術(shù)（浙江瑞安產(chǎn)）揮發(fā)性成分的共有指紋圖譜，見圖1-4-7。對照共有指紋圖譜，10個(gè)批次溫莪術(shù)油的相似性分析結(jié)果見表1-4-7。

從此結(jié)果可以看出，10批次溫莪術(shù)揮發(fā)油樣本的相似度均在90%以上，未發(fā)現(xiàn)離群樣本，符合國家食品藥品監(jiān)督管理總局對中藥指紋圖譜相似度的要求。

李想等采用毛細(xì)管氣相色譜法對莪術(shù)油進(jìn)行指紋圖譜鑒定。試驗(yàn)采用Agilent　6890N氣相色譜儀，色譜條件如下：

色譜柱：石英彈性毛細(xì)管HP-5（30m×0.32mm）WCOT柱；

固定相：5%苯基甲聚硅氧烷；

程序升溫：柱初始溫度為100℃，保持5分鐘后以7℃/min升至130℃，在130℃保持15分鐘，然后以5℃/min升至140℃，在140℃保持10分鐘，最后以4℃/min升至220℃；

氫火焰檢測器（FID）：280℃；汽化室溫度：250℃；

載氣：高純度氮（純度＞99.999%）；前柱壓：42kPa；

載氣流速：1ml/min；進(jìn)樣量：1μl；分流比：2.5∶1。

稱取莪術(shù)油樣品約0.1g，置于10ml量瓶中，甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻得供試品溶液。方法學(xué)考察結(jié)果表明本方法精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性均符合要求，適合作為指紋圖譜檢測方法。

取不同批次的莪術(shù)油樣品進(jìn)樣分析，樣品的出峰總數(shù)及其特征峰所占的比例見表1-4-8。

以17批莪術(shù)油為研究對象，對其成分進(jìn)行測定，有16個(gè)主要的共有特征峰（占總峰面積90%以上），選擇8號峰（莪術(shù)烯）為參照峰進(jìn)行計(jì)算，所得結(jié)果進(jìn)行SPSS聚類分析，結(jié)果見圖1-4-8。從聚類結(jié)果中可以看出：第1～12批（除第3批外）聚為一類；第13～17批聚為一類；而第3批樣品則較為分散（即所含成分差異較大），無法成為一類。

由于GC色譜工作站獲得的數(shù)據(jù)與國家藥典委員會(huì)提供的指紋圖譜相似度軟件不兼容，所以本試驗(yàn)采用Excel計(jì)算指紋圖譜的相似度。17批次莪術(shù)油的相似性分析結(jié)果見表1-4-9、1-4-10。計(jì)算結(jié)果：17批樣品相關(guān)系數(shù)分別為0.5198～0.8695（均值）和0.2743～0.9886（中位數(shù)），夾角余弦分別為0.6459～0.9212（均值）和0.5015～0.9884（中位數(shù)），表明17批樣品的相似度低，無法建立莪術(shù)油的共有指紋圖譜。通過聚類分析結(jié)果可將莪術(shù)油分為兩類，自制莪術(shù)油和市售莪術(shù)油各為一類，但遼寧莪術(shù)油的差異較大，無法成為一類。因此基于聚類分析結(jié)果，分別建立了自制莪術(shù)油和市售莪術(shù)油的指紋圖譜的共有模式，并分別具有較高的相似度：第1～12批（除第3、9批外），相關(guān)系數(shù)分別為0.8869～0.9950（均值）和0.8490～0.9980（中位數(shù)），夾角余弦分別為0.9101～0.9952（均值）和0.8770～0.9979（中位數(shù)），第13～17批樣品，相關(guān)系數(shù)分別為0.9547～0.9978（均值）和0.9280～0.9978（中位數(shù)），夾角余弦分別為0.9667～0.9982（均值）和0.9477～0.9978（中位數(shù)）。結(jié)果表明：可以分別建立自制莪術(shù)油和市售莪術(shù)油的指紋圖譜的共有模式，結(jié)果見圖1-4-9。

本試驗(yàn)對中藥莪術(shù)油的指紋圖譜進(jìn)行研究，由圖譜可知：實(shí)驗(yàn)室自制莪術(shù)油的β-欖香烯和莪術(shù)二酮含量低，其中溫莪術(shù)較高，蓬莪術(shù)次之，廣西莪術(shù)含量最低。而市售莪術(shù)油的藥材品種為溫莪術(shù)，β-欖香烯和莪術(shù)二酮的含量高。研究結(jié)果表明：自制莪術(shù)油和市售莪術(shù)油不具有共同的指紋圖譜模式。

彭纓等還對廣西莪術(shù)水煎液化學(xué)成分進(jìn)行分析，采用對莪術(shù)油分析相同的液相色譜、質(zhì)譜條件和分析方法，所得廣西莪術(shù)水煎液總離子流色譜圖和化學(xué)成分鑒定見圖1-4-10和表1-4-11?；衔颿urcolone、zedoarol、zederone分子式均為C ₁₅ H ₁₈O ₃，采用ACD/Chemdraw軟件計(jì)算化合物的親水親油平衡值log P分別為1.59、1.66、1.5，log P值越大，疏水性越強(qiáng)，根據(jù)化合物在反相色譜的保留原則，疏水性越強(qiáng)，出峰越晚，結(jié)合保留時(shí)間可判斷出峰順序?yàn)閦ederone＞curcolone＞zedoarol。

從莪術(shù)油和莪術(shù)水煎液的HPLC-QTOF/MS結(jié)果分析，兩者共有成分有5種，分別為bisacurone epoxide、莪術(shù)二酮、l，7-bis-（4-hydroxyphenyl）-l，4，6-heptatrien-3-one、zederone、curcumenol。試驗(yàn)結(jié)果表明莪術(shù)油與莪術(shù)水煎液中的化學(xué)成分差異很大，莪術(shù)傳統(tǒng)水煎液的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)與莪術(shù)油存在很大差別。在莪術(shù)水煎液中沒有檢測到莪術(shù)醇、新莪術(shù)二酮、β-欖香烯等莪術(shù)油中的藥理活性物質(zhì)。