- 查錫良《生物化學(xué)與分子生物學(xué)》(第8版)考研真題和典型題詳解
- 圣才電子書主編
- 6981字
- 2021-05-20 14:39:27
第二章 核酸的結(jié)構(gòu)與功能
一、A型題(單項選擇題,請從備選答案中選出一個最佳答案)
1.能使外源性侵入基因表達(dá)的mRNA降解的核酸是( )。[西醫(yī)綜合2015年研]
A.snRNA
B.hnRNA
C.siRNA
D.scRNA
【答案】C
【解析】①核內(nèi)小RNA(snRNA)位于細(xì)胞核內(nèi),參與hnRNA的剪接和轉(zhuǎn)運。②hnRNA(不均一核RNA)是mRNA的未成熟前體。③小干擾RNA(siRNA)是生物宿主對于外源侵入基因表達(dá)的雙鏈RNA進(jìn)行切割所產(chǎn)生的具有特定長度和特定序列的小片段RNA,這些siRNA可以單鏈形式與外源基因表達(dá)的mRNA相結(jié)合,并誘導(dǎo)相應(yīng)mRNA降解。④胞質(zhì)小RNA(scRNA)存在于細(xì)胞質(zhì)中,參與形成信號識別顆粒,引導(dǎo)含有信號肽的蛋白質(zhì)進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成
2.如果一個新分離的核酸成分堿基組成為A=27%,G=30%,T=21%,C=22%,這一核酸分子最可能的結(jié)構(gòu)是( )。[西醫(yī)綜合2014年研]
A.雙鏈DNA
B.DNA-RNA雜交雙鏈
C.單鏈RNA
D.單鏈DNA
【答案】D
【解析】組成DNA的堿基包括A、G、C、T,組成RNA的堿基包括A、G、C、U。題干所述核酸分子所含堿基為A、G、C、T,因此該核酸分子應(yīng)為DNA而不是RNA。按照DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的堿基配對原則,若該核酸分子為雙鏈DNA,則A=T,G=C,但題干所述的核酸分子組成不能滿足這一條件,故該核酸分子只可能是單鏈DNA而不可能是雙鏈DNA。
3.DNA理化性質(zhì)中的“Tm”值所表達(dá)的含義是( )。[西醫(yī)綜合2013年研]
A.復(fù)制時的溫度
B.復(fù)性時的溫度
C.50%雙鏈被打開的溫度
D.由B型轉(zhuǎn)變成A型的溫度
【答案】C
【解析】Tm是指核酸分子內(nèi)雙鏈解開50%時的溫度,又稱融鏈溫度(原稱解鏈溫度)。
4.具有左手螺旋的DNA結(jié)構(gòu)是( ?。?。[西醫(yī)綜合2012年研]
A.G-四鏈體DNA
B.A型DNA
C.B型DNA
D.Z型DNA
【答案】D
【解析】天然DNA分子普遍以右手螺旋結(jié)構(gòu)形式存在(又細(xì)分為A型DNA和B型DNA),也存在左手螺旋結(jié)構(gòu),稱為Z型DNA。A項,G-四鏈體是由富含堿基鳥嘌呤(G)的一種特殊的DNA二級結(jié)構(gòu)。
5.下列關(guān)于tRNA的敘述,錯誤的是( )。[西醫(yī)綜合2011年研]
A.分子中含稀有堿基較多
B.分子序列中含有遺傳密碼
C.tRNA分子具三葉草形二級結(jié)構(gòu)
D.所有tRNA的3'端均為-CCA-OH
【答案】B
【解析】A項,在各種RNA中,tRNA為含稀有堿基最多的RNA,稀有堿基占所有堿基的10%~20%,這些稀有堿基包括DHU(雙氫尿嘧啶)、ψ(假尿嘧啶核苷)、mG、mA(甲基化的嘌呤)等。B項,每個tRNA分子中都有3個堿基與mRNA上編碼相應(yīng)氨基酸的密碼子具有堿基反向互補關(guān)系,可以配對結(jié)合,這3個堿基被稱為反密碼子,位于反密碼環(huán)內(nèi)。可見,tRNA分子序列中含有反密碼子,而不是密碼子(遺傳密碼),遺傳密碼位于mRNA上。C項,如圖所示,所有tRNA均呈三葉草形二級結(jié)構(gòu)。D項,從5'→3'依次為:DHU環(huán)+反密碼子環(huán)+TψC環(huán)+相同的CCA-OH結(jié)構(gòu)(即所謂的三環(huán)一柄結(jié)構(gòu))所有tRNA的3'-端的最后3個核苷酸均為CCA,這是氨基酸的結(jié)合部位,稱氨基酸接納莖。
6.一個DNA分子中,若G所占的摩爾比是32.8%,則A的摩爾比應(yīng)是( )。[西醫(yī)綜合2011年研]
A.67.2%
B.65.6%
C.32.8%
D.17.2%
【答案】D
【解析】根據(jù)DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型(Watson.Crick模型),DNA雙鏈的堿基間嚴(yán)格按A=T、G=C配對存在,因此A+G與C+T的比值為1。若G所占的摩爾比是32.8%,則G+C=65.6%,A+T=34.4%,其中A=17.2%。
7.下列選項中,符合tRNA結(jié)構(gòu)特點的是( ?。?。[西醫(yī)綜合2010年研]
A.5'-末端的帽子
B.3'-末端多聚A尾
C.反密碼子
D.開放閱讀框
【答案】C
【解析】所有tRNA均呈三葉草樣二級結(jié)構(gòu)(如圖)。從5'~3'依次為:DHU環(huán)+反密碼予子環(huán)+TΨC環(huán)+CCA結(jié)構(gòu)。每個tRNA分子中都有3個堿基與mRNA上編碼相應(yīng)氨基酸的密碼子具有堿基反向互補關(guān)系,可以配對結(jié)合,這3個堿基被稱為反密碼子,位于反密碼環(huán)內(nèi)。ABD三項,真核mRNA的結(jié)構(gòu)為5'-帽結(jié)構(gòu)+5'非翻譯區(qū)+編碼區(qū)+3'非翻譯區(qū)+3'多聚腺苷尾,因此,5'末端含有帽子結(jié)構(gòu)m7GpppN(7-甲基鳥嘌呤-三磷酸核苷)、3'-末端含有多聚A尾,中間含有開放閱讀框,是mRNA的結(jié)構(gòu)特點。
8.下列DNA分子中,解鏈溫度(Tm)最高的是( ?。?。[西醫(yī)綜合2009年研]
A.腺嘌呤和胸腺嘧啶含量占20%
B.腺嘌呤和胸腺嘧啶含量占60%
C.鳥嘌呤和胞嘧啶含量占30%
D.鳥嘌呤和胞嘧啶含量占50%
【答案】A
【解析】DNA在各種因素作用下,由雙鏈解離為單鏈的過程稱為DNA變性。解鏈溫度(又稱融鏈溫度Tm)是指核酸分子內(nèi)雙鏈解開50%時的溫度。Tm大小與DNA分子中所含堿基的鳥嘌呤(G)和胞嘧啶(C)含量有關(guān),GC含量越高,Tm值越大,這是由于G=C堿基對有3個氫鍵,比只有兩個氫鍵的A=T堿基對更穩(wěn)定。A項,A+T占20%,即G+C占80%。B項,A+T占60%,即G+C占40%。C項,G+C占30%。D項,G+C占50%。
9.下列RNA中,參與形成原核生物50S大亞基的是( )。[西醫(yī)綜合2008年研]
A.28SrRNA
B.23SrRNA
C.16SrRNA
D.hnRNA
【答案】B
【解析】核蛋白體由大、小兩個亞基組成,每個亞基都由多種核蛋白體蛋白質(zhì)和rRNA組成。原核生物的rRNA有3種,即5SrRNA、16SrRNA和23SrRNA,小亞基(30S)由16SrRNA和21種蛋白質(zhì)(rpS)構(gòu)成,大亞基(50S)由5SrRNA、23SrRNA和36種蛋白質(zhì)(rpL)構(gòu)成。D項,hnRNA為mRNA未成熟的前體。
10.按照Chargaff規(guī)則,下列關(guān)于DNA堿基組成的敘述,正確的是( ?。?。[西醫(yī)綜合2007年研]
A.A與C的含量相等
B.A+T=G+C
C.同一生物體,不同組織的DNA堿基組成不同
D.不同生物來源的DNA,堿基組成不同
【答案】D
【解析】20世紀(jì)40年代,Chargaff等提出了DNA分子四種堿基組成的Chargaff規(guī)則:①不同生物種屬的DNA堿基組成不同(D對)。②同一個體不同器官、不同組織的DNA具有相同的堿基組成。③幾乎所有DNA,無論種屬來源,其A-T、G-C摩爾數(shù)相同。這一規(guī)則預(yù)示著DNA分子中的A-T、G-C可能互補配對。
11.核酸的最大紫外光吸收值一般在哪一波長附近?( )[西醫(yī)綜合2007年研]
A.280nm
B.260nm
C.240nm
D.220nm
【答案】B
【解析】核酸分子的嘌呤和嘧啶環(huán)中均含有共軛雙鍵,因此,核酸在240~290nm的紫外波段有強烈吸收,其最大吸收值在260nm附近。類似的:色氨酸、酪氨酸最大吸收峰在280nm附近。
12.核酸變性后,可產(chǎn)生的效應(yīng)是( ?。?。[西醫(yī)綜合2007年研]
A.增色效應(yīng)
B.最大吸收波長發(fā)生轉(zhuǎn)移
C.失去對紫外線的吸收能力
D.溶液黏度增加
【答案】A
【解析】A項,DNA(脫氧核糖核酸)變性是指在某些理化因素作用下,DNA雙鏈的互補堿基對之間的氫鍵斷裂,使DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)松散,成為單鏈的現(xiàn)象。①DNA變性時,解鏈過程中,由于更多的共軛雙鍵得以暴露,DNA在紫外區(qū)260nm處的吸收值增加,并與解鏈程度有一定的比例關(guān)系,稱DNA的增色效應(yīng)。B項,DNA變性后,吸收波長并不發(fā)生轉(zhuǎn)移。D項,DNA變性時,由原來比較“剛硬”的雙螺旋結(jié)構(gòu),分裂成兩條比較柔軟的單股多核苷酸鏈,從而引起溶液黏度降低。
13.下列關(guān)于ribozyme的敘述,正確的是( ?。?。[西醫(yī)綜合2007年研]
A.即核酸酶
B.本質(zhì)是蛋白質(zhì)
C.本質(zhì)是核糖核酸
D.其輔酶是輔酶A
【答案】C
【解析】A項,核酸酶是指能夠水解核酸的酶,其本質(zhì)是蛋白質(zhì),包括DNA酶(DNase)和RNA酶(RNase)。BC兩項,某些RNA本身具有催化能力,可以完成rRNA的剪接,這種具有催化作用的小RNA稱核酶(ribozyme)??梢妑ibozyme的本質(zhì)是RNA,即核糖核酸。絕大多數(shù)的酶本質(zhì)上都是蛋白質(zhì),但核酶例外。D項,輔酶A是?;D(zhuǎn)移酶(本質(zhì)是蛋白質(zhì))的輔酶,廣泛參與糖、脂類、蛋白質(zhì)代謝及肝的生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)。
14.下列關(guān)于mRNA的敘述,錯誤的是( ?。?。[西醫(yī)綜合2006年研]
A.在細(xì)胞核內(nèi)由hnRNA剪接而成
B.真核生物mRNA有“帽子”和“多聚A尾”結(jié)構(gòu)
C.生物體中各種mRNA的長短不同相差很大
D.是各種RNA分子中半衰期最長的一類
E.其功能是作為蛋白質(zhì)合成的模板
【答案】D
【解析】A項,hnRNA(不均一核RNA)是mRNA的未成熟前體。hnRNA在細(xì)胞核內(nèi)存在時間極短,經(jīng)過剪接成為成熟的mRNA。B項,大部分真核細(xì)胞的mRNA的5'-末端以7-甲基鳥嘌呤-三磷酸鳥苷為起始結(jié)構(gòu),這種m7GpppN結(jié)構(gòu)稱帽子結(jié)構(gòu);在3`-末端,大多數(shù)是由數(shù)十個至百余個腺苷酸連接而成的多聚腺苷酸結(jié)構(gòu),稱多聚A尾。C項,生物體內(nèi)各種mRNA鏈的長短差異很大。D項,在各種RNA中,mRNA的半衰期最短,由幾分鐘至數(shù)小時不等。E項,mRNA的功能是轉(zhuǎn)錄核內(nèi)DNA遺傳信息的堿基排列順序,并攜帶至細(xì)胞質(zhì),以此為模板指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成中的氨基酸排列順序。
15.DNA受熱變性時,出現(xiàn)的現(xiàn)象是( ?。?span id="7dtimbq" class="ZhenTiTag">[西醫(yī)綜合2005年研]
A.多聚核苷酸鏈水解成單核苷酸
B.在26nm波長處的吸光度增加
C.堿基對以共價鍵連接
D.溶液黏度增加
E.最大光吸收峰波長發(fā)生轉(zhuǎn)移
【答案】B
【解析】A項,DNA在各種因素(加熱、加酸或加堿)作用下,由雙鏈解開的過程稱變性。此過程中維系堿基配對的氫鍵斷裂,但不伴隨共價鍵的斷裂,DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)變成松散的單鏈,并非多核苷酸鏈水解成單核苷酸。B項,在DNA解鏈過程中,由于更多的共軛雙鍵得以暴露,DNA在紫外區(qū)260nm處的吸光值增加。C項,堿基對以氫鍵連接。D項,DNA變性時,結(jié)構(gòu)松散,致使分子的不對稱性變小,故溶液黏度降低。E項,DNA變性時,因嘌呤和嘧啶分子未發(fā)生變化,所以最大吸收峰的波長不會發(fā)生轉(zhuǎn)移。
16.下列核酸中哪一種不會與變性的牛肝細(xì)胞核DNA雜交?( ?。?span id="9krptqf" class="ZhenTiTag">[廈門大學(xué)2009研]
A.腎tRNA
B.變性的牛肝細(xì)胞核DNA
C.變性的線粒體DNA
D.肝mRNA
【答案】A
【解析】分子雜交是指按照堿基互補配對原則使不同來源的不完全互補的兩條多核苷酸鏈相互結(jié)合的過程。可在DNA與DNA,RNA與RNA,或DNA與RNA之間進(jìn)行,形成DNA-DNA,RNA-RNA或RNA-DNA等不同類型的雜交分子。A項,腎tRNA與變性的牛肝細(xì)胞核DNA不具有互補關(guān)系,不能進(jìn)行分子雜交。
二、B型題(配伍選擇題,每組題共用一組備選答案,每題只有一個正確答案,備選答案可重復(fù)選用。)
A.hnRNA
B.siRNA
C.snoRNA
D.5S rRNA
1.能對外源侵入的雙鏈RNA進(jìn)行切割的核酸是( ?。?。[西醫(yī)綜合2011年研]
【答案】B
2.能與核內(nèi)蛋白質(zhì)組成核蛋白體的是( ?。?。[西醫(yī)綜合2011年研]
【答案】D
【解析】A項,hnRNA(不均一核RNA、雜化核RNA)為成熟mRNA的前體。B項,siDNA(小干擾RNA)是細(xì)胞內(nèi)一類雙鏈RNA(dsRNA)在特定情況下通過一定酶切機制,轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂刑囟ㄩL度和特定序列的小片段RNA。它能識別、清除外源dsRNA或同源單鏈RNA,提供一種防御外源核酸入侵的保護(hù)措施。C項,snoRNA(核仁小RNA)主要功能為參與rRNA的加工修飾。D項,rRNA與核糖體蛋白共同構(gòu)成核糖體,成為蛋白質(zhì)合成的場所。原核生物有3種rRNA,即5S rRNA、16S rRNA、23S rRNA。真核生物有4種rRNA,即5S rRNA、5.8S rRNA、18S rRNA、28S rRNA。
三、X型題(多項選擇題)
1.能參與切割mRNA的生物分子包括( ?。?span id="2px1wuz" class="ZhenTiTag">[西醫(yī)綜合2015年研]
A.miRNA
B.siRNA
C.5.8S rRNA
D.tRNA
【答案】AB
【解析】A項,微RNA(miRNA)主要是通過結(jié)合mRNA而選擇性調(diào)控基因的表達(dá)。B項,小干擾RNA(siRNA)可以單鏈形式與外源基因表達(dá)的mRNA相結(jié)合,并誘導(dǎo)相應(yīng)mRNA降解。C項,5.8S rRNA主要參與構(gòu)成真核生物的大亞基。D項,tRNA的主要功能是運送氨基酸。
2.真核生物的mRNA結(jié)構(gòu)包括( ?。?。[西醫(yī)綜合2014年研]
A.TATA盒
B.5'-末端7甲基鳥嘌呤核苷
C.3'-末端多聚腺苷酸
D.開放閱讀框
【答案】BCD
【解析】真核生物的mRNA結(jié)構(gòu)如下。①在5'-端有一反式的7-甲基鳥嘌呤-三磷酸核苷(m7Gppp),被稱為5'-帽結(jié)構(gòu)。②在3'-端有一段由80~250個腺苷酸連接而成的多聚腺苷酸結(jié)構(gòu),稱為多聚腺苷酸尾或多聚A尾(po1yA)。3'多聚A尾和5'-帽結(jié)構(gòu)共同負(fù)責(zé)mRNA從細(xì)胞核內(nèi)向細(xì)胞質(zhì)的轉(zhuǎn)運、維系mRNA的穩(wěn)定性以及翻譯起始的調(diào)控。③成熟mRNA由編碼區(qū)和非編碼區(qū)組成。從成熟mRNA的5'-端第一個AUG至終止密碼之間的核苷酸序列稱為開放讀框(ORF),決定多肽鏈的氨基酸序列。在開放閱讀框兩側(cè),還有非編碼序列。A項,TATA盒是真核啟動子的核心序列,并不是真核生物mRNA的結(jié)構(gòu)。
3.下列關(guān)于DNA二級結(jié)構(gòu)模型的敘述,正確的是( )。[西醫(yī)綜合2010年研]
A.是右手雙螺旋結(jié)構(gòu)
B.兩股脫氧核苷酸鏈呈同向平行
C.兩股鏈間存在堿基配對關(guān)系
D.螺旋每周含10對堿基
【答案】ACD
【解析】DNA二級結(jié)構(gòu)模型,即雙螺旋結(jié)構(gòu)模型,又稱Watson.Crick結(jié)構(gòu)模型。①DNA是反平行、右手螺旋的雙鏈結(jié)構(gòu),兩條多聚核苷酸鏈在空間上的走向呈反向平行。一條鏈的走向為5'→3',另一條為3'→5'。DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的直徑為2.37nm,螺距為3.54rim。每一螺旋有10.5個堿基對。②DNA雙鏈之間形成互補堿基對,兩條鏈的堿基間嚴(yán)格按A=T(2個氫鍵)、G;C(3個氫鍵)配對存在,因此A+G與C+T的比值為1。③DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定靠疏水作用力和氫鍵共同維系,前者維系縱向穩(wěn)定性,后者維系橫向穩(wěn)定性。
四、填空題
1.tRNA分子3'末端的最后三個核苷酸為______。[暨南大學(xué)2011研]
【答案】CpCpAOH
2.DNA的變性溫度(Tm)的大小與______、______、______等因素有關(guān)。[暨南大學(xué)2011研]
【答案】DNA的均一性;G-C的含量;介質(zhì)中的離子強度
3.核苷三磷酸在代謝中起著重要的作用。ATP是通用的能量載體,CTP參與甘油磷脂的合成,GTP提供肽鏈合成所需要的能量,______參與多糖的合成。[中山大學(xué)2009研]
【答案】UTP
【解析】UTP是3分子的磷酸結(jié)合在尿苷的核糖5'-OH基上的核苷酸,與糖類代謝有密切關(guān)系,由UTP與1-磷酸葡糖經(jīng)酶催化生成UDP-葡糖與焦磷酸。此外,也生成UDP-半乳糖、UDP-半乳糖胺、UDP-萄糖醛酸等。
4.在各種RNA中,______的含量最多,______的壽命最短,______含稀有堿基最多。[廈門大學(xué)2009研]
【答案】rRNA;mRNA;tRNA
【解析】rRNA是組成核糖體的主要成分,占RNA總量的75%~85%;mRNA在指導(dǎo)合成完一條肽鏈后,會迅速分解成核糖核苷酸;tRNA中的稀有堿基占堿基總量的10%~20%,是含稀有堿基最多的RNA。
五、判斷題
1.DNA的Tm值和A-T含量有關(guān),A-T含量高則Tm高。( ?。?span id="xqodhyd" class="ZhenTiTag">[東北農(nóng)業(yè)大學(xué)2011研]
【答案】錯
【解析】DNA中G-C含量高則Tm高,A-T含量高則Tm低。
2.tRNA一般具有一柄三環(huán),其空間結(jié)構(gòu)呈三葉草形。( ?。?span id="orc8tw9" class="ZhenTiTag">[中山大學(xué)2008研]
【答案】錯。
【解析】tRNA一般具有一柄四環(huán),其空間結(jié)構(gòu)呈倒“L”型。
3.Z型DNA與B型DNA可以相互轉(zhuǎn)變。( )
【答案】對
【解析】天然B型DNA的局部區(qū)域可以出現(xiàn)Z型DNA,說明B型DNA與Z型DNA之間是可以相互轉(zhuǎn)變的。
六、名詞解釋
1.堿基互補規(guī)律[廈門大學(xué)2009研;浙江農(nóng)林大學(xué)2012研]
答:堿基互補規(guī)律是指在DNA或某些雙鏈RNA分子結(jié)構(gòu)中,由于堿基之間的氫鍵具有固定的數(shù)目和DNA兩條鏈之間的距離保持不變,使得堿基配對必須遵循一定的規(guī)律,即在DNA中,A(腺嘌呤)一定與T(胸腺嘧啶)配對;在RNA中,A(腺嘌呤)與U(尿嘧啶)配對;G(鳥嘌呤)一定與C(胞嘧啶)配對。
2.DNA一級結(jié)構(gòu)
答:DNA一級結(jié)構(gòu)是指DNA分子中4種脫氧核苷酸(A、G、C、T)自5'-端至3'-端的排列順序,是核酸分子中儲存、傳遞遺傳信息的關(guān)鍵部分。
3.核酶(ribozyme)
答:核酶是具有催化作用的小分子RNA,具有自身催化或催化其他RNA降解的活性。在RNA的剪接修飾中具有重要作用。核酶最先從四膜蟲rRNA中發(fā)現(xiàn)其催化自我剪接的作用。
4.DNA的增色效應(yīng)和減色效應(yīng)
答:DNA的增色效應(yīng)是指在DNA解鏈過程中,由于有更多的共軛雙鍵得以暴露而使DNA溶液在紫外線260nm處的吸收值增加,它是監(jiān)測DNA雙鏈?zhǔn)欠癜l(fā)生變性的一個最常用的指標(biāo);DNA的減色效應(yīng)是指隨著DNA的退火復(fù)性而在260nm處吸收值下降。
5.DNA變性(DNA denaturation)
答:DNA變性是指在理化因素作用下,DNA分子中的氫鍵斷裂,堿基堆積力遭到破壞,雙螺旋結(jié)構(gòu)解體,雙鏈分開形成單鏈的過程。DNA變性破壞了DNA的空間結(jié)構(gòu),但沒有改變它的核苷酸序列。
6.Tm
答:Tm(melting temperature)是指DNA解鏈溫度,即在DNA熱變性中,紫外線260nm處吸光度的變化△A260達(dá)到最大變化值的一半時所對應(yīng)的溫度。DNA的Tm值與DNA長短以及堿基的GC含量相關(guān)。GC的含量越高,Tm值越高;離子強度越高,Tm值也越高。
七、簡答題
1.DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)有什么特點?如何用DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)說明重要的生命現(xiàn)象?
答:(1)DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的特點是:
①雙鏈反向平行排列;
②右手螺旋,螺旋直徑2nm,每旋一周為10個堿基對,螺距3.4nm,螺旋表面有大小溝各一個;
③堿基互補(A對T;G對C)形成的氫鍵維持橫向穩(wěn)定,堿基平面間疏水性堆積力維持縱向穩(wěn)定。
(2)DNA雙螺旋是互補的兩條鏈,DNA復(fù)制可以形成與母代一樣的子代,保證DNA作為遺傳載體的忠實性;此外,RNA轉(zhuǎn)錄按DNA上的信息進(jìn)行,保證蛋白質(zhì)生物合成按DNA上的信息進(jìn)行。
2.怎樣通過紫外吸收法判斷核酸的純度以及對純核酸進(jìn)行定量?[暨南大學(xué)2011研]
答:嘌呤堿與嘧啶堿具有共軛雙鍵,使堿基、核苷、核苷酸和核酸在240~290nm的紫外波段有一個強烈的吸收峰,最大吸收值在260nm附近。不同核苷酸有不同的紫外吸收特性。所以可以用紫外分光光度計加以定量及定性測定。
(1)紫外吸收法判斷核酸的純度
讀出核酸260nm與280nm的吸光度(A)即光密度(OD)值,從A260/A280的比值即可判斷樣品的純度。純DNA的A260/A280應(yīng)大于1.8,純RNA應(yīng)達(dá)到2.0。樣品中如含有雜蛋白及苯酚,A260/A280比值明顯降低。不純的樣品不能用紫外吸收法作定量測定。
(2)紫外吸收法對純核酸進(jìn)行定量
對于純的樣品,只要讀出260nm的A值即可算出含量。通常以A值為1相當(dāng)于50μg/mL雙螺旋DNA,或40μg/mL單鏈DNA(或RNA),或20μg/mL寡核苷酸來計算。這個方法既快速,又相當(dāng)準(zhǔn)確,而且不會浪費樣品。對于不純的核酸可以用瓊脂糖凝膠電泳分離出區(qū)帶后,經(jīng)溴化乙錠染色在紫外燈下粗略地估計其含量。
3.假如你從某一動物組織提取一份總RNA樣品,可采用一些什么方法檢測它的質(zhì)量(完整性)、純度和濃度?并說明判斷的依據(jù)。[中山大學(xué)2009研]
答:(1)①RNA樣品的質(zhì)量(完整性)和純度檢測
可通過瓊脂糖變性電泳分析檢測。常見的變性電泳有甲醛變性電泳,戊二醛變性電泳等。
②RNA樣品的濃度檢測
可通過紫外分光光度計確定,選260nm、230nm、280nm和310nm波長讀數(shù)。其中260nm讀數(shù)用來估算樣品中核酸濃度,310nm為背景吸收值。1個樣品濃度的比值用于估計核酸的純度,估計去鹽的程度。
(2)判斷依據(jù)如下:
①完整的RNA的甲醛電泳可明顯地觀察到28S和18S兩條帶,并且28S大約是18S的兩倍寬。若兩條帶不明顯,則說明RNA部分降解,可能的原因是污染了RNase或操作劇烈。
②對于RNA純制品,其可能是蛋白污染所致,可以增加酚抽提;說明去鹽不充分,可以再次沉淀和70%乙醇洗滌。
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