技能實訓1.3　柱色譜練習

【實驗目的】

1.了解用柱色譜法分離提純化合物的原理；

2.熟悉并掌柱色譜的基本操作。

【實驗原理】

柱色譜根據填充成分的不同，可分為吸附、分配、大孔樹脂、凝膠、離子交換等種類。

【實驗儀器和試劑】

1.儀器：15～20cm色譜柱，分液漏斗，漏斗，洗耳球。

2.試劑：硅膠G（柱色譜分離用），含0.5%甲基橙0.5%亞甲基藍混合液，95%乙醇。

【實驗方法與步驟】

1.裝柱

色譜柱中，裝入小量脫脂棉，輕輕壓平。將干燥硅膠G經漏斗成一細流流入柱中，不要中斷，用洗耳球或橡皮錘輕輕敲打柱子下端，使硅膠G填充均勻，緊密適度。然后經分液漏斗沿柱壁注入95%乙醇，使硅膠G全部潤濕，同時打開下端活塞，控制流速為1滴/s，并用一燒杯收集乙醇。

2.裝樣

用滴管將含0.5%甲基橙0.5%甲基藍的混合液沿柱壁注入，裝入柱頂部，待混合液剛好全部進入固定相中，打開滴液漏斗，流入流動相（95%乙醇）。流動相進入速度應適當，即在固定相中頂部有2cm左右流動相即可。

3.洗脫

95%乙醇不斷加入，甲基橙易溶于乙醇中而不易吸附在固定相中，隨流動相往下洗脫較快，而甲基藍易被吸附，洗脫速度慢。十幾分鐘后可見柱子中橙紅色甲基橙處于柱子下端，而藍色的甲基藍在柱子上端。甲基橙、甲基藍達到良好分離。

4.收集

根據洗脫液顏色，分別收集乙醇（無色，回收）、甲基橙（橙色）、甲基藍。

【實驗結果與分析】

1.記錄甲基橙（橙色）、甲基藍流出時間。

2.甲基橙（橙色）、甲基藍流出先后與極性的關系。