第三節　藥物的鑒別方法

藥物的鑒別方法要求專屬性強、重現性好、靈敏度高，以及操作簡便、快速等。常用鑒別方法有化學鑒別法、光譜鑒別法、色譜鑒別法和生物學鑒別法等。

一、化學鑒別法

化學鑒別法是在供試品中加入適當的試劑，在一定條件下，發生化學反應，通過產生可觀測到的明顯現象，來鑒別藥物真偽的方法。本法具有反應迅速、現象明顯明確、實驗成本低、應用廣的特點，但專屬性比儀器分析法差。

1.呈色反應鑒別法

呈色反應鑒別法是指供試品溶液中加入適當的試劑溶液，在一定條件下進行反應，生成易于觀測的有色產物。

在鑒別試驗中最為常用的反應類型如下。

①三氯化鐵呈色反應：多用于鑒別含有酚羥基或水解后產生酚羥基的藥物。

②異羥肟酸鐵反應：多用于鑒別含有芳香酸及其酯類、酰胺類的藥物。

③三酮呈色反應：多用于含有脂肪氨基的藥物。

④重氮化-偶合顯色反應：多用于芳伯氨基或能產生芳伯氨基的藥物。

⑤氧化還原顯色反應及其他顏色反應。

2.沉淀生成反應鑒別法

常用的此類反應如下。

（1）與重金屬離子的沉淀反應　在一定條件下，藥物和重金屬離子反應，生成不同形式的沉淀。

（2）與硫氰化鉻銨（雷氏鹽）的沉淀反應　多為生物堿及其鹽，具有芳香環的有機堿及其鹽。

（3）其他　沉淀反應。

3.熒光反應鑒別法

常用的熒光發射形式有以下類型。

①藥物本身可在可見光下發射熒光。

②藥物溶液加硫酸使呈酸性后，在可見光下發射熒光。

③藥物和溴反應后，于可見光下發射出熒光。

④藥物和間苯二酚反應后發射出熒光及藥物經其他反應后發射熒光。

4.氣體生成反應鑒別法

①大多數的胺（銨）類藥物、酰脲類藥物以及某些酰胺類藥物，可經強堿處理后，加熱，產生氨氣。

②化學結構中含硫的藥物，可經強酸處理后，加熱，發生硫化氫氣體。

③含碘有機藥物經直火加熱，可生成紫色碘蒸氣；含醋酸酯和乙酰胺類藥物，經硫酸水解后，加乙醇可產生乙酸乙酯的香味。

二、光譜鑒別法

1.紫外光譜鑒別法

紫外吸收光譜是物質分子在紫外可見光區（200～780nm）由于電子能級的躍遷而產生的光譜，稱為紫外-可見吸收光譜。利用紫外吸收光譜進行分析鑒別的方法就稱為紫外光譜法。不同結構的藥物會顯示不同的吸收光譜，可作為鑒別的依據。該法主要適用于具有苯環或共軛體系的有機藥物分子。紫外光譜鑒別法具有操作簡便、反應快速的特點。

常用的紫外光譜鑒別方法有：

①測定最大吸收波長，或同時測定最小吸收波長；

②規定濃度的供試液在最大吸收波長測定吸光度；

③規定吸收波長和吸收系數法；

④規定吸收波長和吸光度比值法；

⑤經化學處理后，測定其反應產物吸收光譜特性。

以上方法可以單獨使用，也可幾個結合起來使用，以提高方法的專屬性。

【案例】　《中國藥典》（2015年版）貝諾酯的鑒別：取本品適量，精密稱定，加無水乙醇溶解并定量稀釋成每1ml中約含7.5μg的溶液，照紫外-可見分光光度法測定，在240nm的波長處有最大吸收，測定吸光度，按干燥品計算，吸收系數（）為730～760。

2.紅外光譜鑒別法

紅外吸收光譜（4000～400cm-1）是物質分子的振動、轉動能級躍遷產生的吸收光譜。利用紅外吸收光譜進行分析鑒別的方法就稱為紅外光譜法。該法主要用于組分單一、結構明確的原料藥物，特別適合用其他方法不易區分的同類藥物的鑒別。紅外光譜在用于藥物的鑒別時，主要比較供試品光譜與對照光譜的一致性，來判定兩化合物是否為同一物質。該法具有專屬性很強、應用較廣（固體、液體、氣體樣品）的特點。

《中國藥典》（2015年版）多采用標準圖譜法，就是參照藥典委員會編纂的《藥品紅外光譜集》按指定條件繪制供試品的紅外光吸收圖譜，與相應標準圖譜對比，如果峰位、峰形、相對強度都一致時，即為同一種藥物。《美國藥典》多采用對照品比較法，就是將供試品與對照品在同樣的條件下繪制紅外圖譜，對比供試品與對照品圖譜中的最大吸收波數彼此是否一致。該法可消除不同儀器和操作條件造成的誤差。

【案例】　《中國藥典》（2015年版）規定頭孢克洛的紅外色譜法鑒別試驗為：本品的紅外光吸收圖譜應與對照品的圖譜一致。如不一致，可分別取本品和對照品適量，加甲醇溶解，揮干溶劑后，取殘留物照紅外分光光度法（通則0402）測定，二者的紅外光吸收圖譜應一致。

三、色譜鑒別法

色譜鑒別法是利用不同物質在不同色譜條件下，產生各自的特征色譜行為（比移值或保留時間）進行鑒別試驗。同一種藥物在同樣條件下的色譜行為是相同的，依此可以鑒別藥物及其制劑的真偽。常用的色譜鑒別方法有薄層色譜鑒別法、高效液相色譜鑒別法、氣相色譜鑒別法、紙色譜鑒別法，這里只介紹前兩種方法。

1.薄層色譜鑒別法

在實際工作中，一般采用對照品比較法，即將供試品和對照品用同種溶劑配成同樣濃度的溶液，在同一薄層板上點樣、展開、顯色，供試品所顯主斑點的顏色、位置應與對照品的主斑點相同，斑點位置以比移值來表示。薄層色譜法是一種簡便易行的方法，一般用于藥品的鑒別或雜質檢查。

【案例】　《中國藥典》（2015年版）規定諾氟沙星的薄層色譜法鑒別試驗為：取本品與諾氟沙星對照品適量，分別加三氯甲烷-甲醇（1:5:1）制成每1ml中含2.5mg的溶液，作為供試品溶液與對照品溶液，照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取上述兩種溶液各1μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃氨溶液（15:10:3）為展開劑，展開，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品溶液所顯主斑點的位置與熒光應與對照品溶液主斑點的位置與熒光相同。

2.高效液相色譜鑒別法

是采用高壓輸液泵將規定的流動相泵入裝有填充劑的色譜柱中進行分離測定的色譜方法。注入的供試品，由流動相帶入色譜柱內，各成分在柱內被分離，并依次進入檢測器，由數據處理系統記錄色譜信號。此法專屬性較強，但操作費時，故一般在“檢查”或“含量測定”項下已采用高效液相色譜法的情況下，才采用此法鑒別。

【案例】　《中國藥典》（2015年版）規定頭孢克洛的高效液相色譜法鑒別試驗為：取本品適量，照含量測定項下方法試驗，供試品的主峰保留時間應與頭孢克洛對照品主峰的保留時間一致。

四、生物學鑒別法

系利用藥效學和分子生物學等有關技術來鑒定藥物品質的一種方法，主要用于抗生素、生化藥物以及中藥的鑒別。