2.4　污水生物指標測定

2.4.1　如何測定污水的大腸菌群數？

（1）稀釋

①以無菌操作將檢樣25g（mL）放于含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內或滅菌乳缽內，經充分振搖或研磨做成1∶10的均勻稀釋液。

②用1mL滅菌吸管吸取1∶10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內，振搖試管混勻，做成1∶100的稀釋液。

③另取1mL滅菌吸管，按上條操作依次做10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用1支1mL滅菌吸管。

④根據對檢樣污染情況的估計，一般選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種三管。

⑤乳糖發酵試驗　將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發酵管內，每一稀釋度接種三管，置36℃±1℃培養箱內，培養24h±2h，如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣，則可報告大腸菌群陰性，如有產氣者則繼續做以下實驗。

（2）分離培養

將產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上，置36℃±1℃培養箱內培養18～24h，然后取出，觀察菌落形態，并做革蘭染色和證實試驗。

（3）證實試驗

在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1～2個進行革蘭染色，同時接種乳糖發酵管，置36℃±1℃培養箱內培養24h±2h，觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭染色為陰性的無芽孢桿菌，即可報告為大腸菌群陽性。

（4）報告

根據證實為大腸菌群陽性的管數，查MPN檢索表，報告每100mL（g）大腸菌群的MPN值。

2.4.2　如何測定污水的病毒數？

有很多名詞都用來描述病毒溶液的滴度：VP（病毒顆粒）或OPV（光學顆粒單位）；GTU（基因轉移單位）或轉導顆粒（BFU即藍點形成單位，與GTU類似）；PFU（空斑形成單位）；TCID50（50%組織培養感染劑量）。

不同的概念緣于不同的滴度測定方法，這些方法包括2類：物理方法（VP）和生物學方法（GTU、PFU、TCID50）。

（1）測定VP的方法是測定病毒顆粒在260nm處的吸光度（病毒DNA和蛋白的總吸光度中主要為DNA），1個OD值相當于1.1×1012個病毒顆粒。用這種方法進行測定在各個實驗室中都較為穩定，但它不能區分感染性和缺陷性病毒顆粒。因此這種方法只能提供病毒的量，至于質，比如是否含有缺陷性顆粒則沒有考慮在內。

（2）GTU則測定感染后能表達報告基因的細胞數量。這個過程中，病毒將DNA轉入細胞，在一個感染周期結束前立即測定表達報告基因的細胞。如果重組腺病毒含有報告基因如GFP或LacZ等則可以用這種方法進行測定，病毒保存液通常不用這種方法來進行描述。

（3）PFU是測定腺病毒滴度最早的標準方法，主要測定單層細胞培養中病毒裂解空斑的形成。空斑形成需要許多個感染周期，得到最終結果通常需要三個星期。一般來說，這種方法得到的結果很少能在其他實驗室重復，即使在同一實驗室內，不同技術員操作也很少能得到相同的結果。

（4）TCID50已被用于測定許多種病毒的滴度，但以前并不用于腺病毒。病毒稀釋液與細胞在96孔板進行培養，然后監測每孔是否CPE。TCID50方法相對PFU方法而言有幾個優點，如速度是PFU的2倍，結果更具預料性，在不同操作個體間也更穩定。

所有生物學方法所得到的結果在不同實驗室之間往往有所差異，它主要與病毒感染方法有關。許多因素如加入的病毒儲存液的量、管子的類型、培養的時間、細胞和培養液的量等都會影響結果。

2.4.3　如何測定污水的菌落總數？

菌落總數計數的研究已有很多，目前國標規定的方法為平板計數法，其檢驗方法是：在玻璃平皿內，接種1mL水樣或稀釋水樣于加熱液化的培養基中，冷卻凝固后在37℃培養24h，培養基上的菌落數或乘以水樣的稀釋倍數即為菌落總數。有的國家把培養溫度定為35℃或其他溫度，也有把培養時間定為48h的。這種方法精度高，但耗時長，難以滿足實際工作需要。為了簡化檢測程序、縮短檢測時間，國內外學者進行了大量的快速檢測方法的研究，提出了阻抗檢測法、SimplateTM全平器計數法、微菌落技術、紙片法等檢測方法，取得了一定的成果，但檢測時間仍在4h以上。

2.4.4　城鎮污水處理廠生物指標排放標準是多少？

表2-5為城鎮污水處理廠污染物排放標準（GB18918—2002）規定的三級排放標準的生物指標。