第二節　絲膠蛋白吸附工藝

一、實驗部分

（1）實驗儀器。燒杯、玻璃棒、分光光度計、移液管、恒溫水浴鍋、烘箱、電子天平、秒表、溫度計、pH試紙、表面皿、鑷子等。

（2）實驗試劑。蒸餾水、冰塊、離子液體鐵配合物、氫氧化鈉、鹽酸、七水硫酸亞鐵、絲膠蛋白。

二、吸附實驗操作

首先配制好不同濃度的絲膠蛋白溶液，攪拌均勻后，加入不同質量的離子液體鐵配合物使其充分反應，最后通過觀察反應后絲膠蛋白的吸光度值來測定絲膠蛋白的吸附率。本實驗主要考查不同濃度、不同固體質量、不同反應時間、不同反應溫度、不同pH條件對離子液體鐵配合物吸附絲膠蛋白的影響。

1.絲膠蛋白標準曲線

配制5個不同濃度的絲膠蛋白溶液（濃度分別為1mg/mL、0.75mg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL、0.125mg/mL）。

（1）用電子天平準確稱取0.1g絲膠蛋白于燒杯中，加入100mL蒸餾水，并用玻璃棒攪拌使其全部溶解，配成濃度為1mg/mL的溶液。

（2）用移液管分別取1.5mL蒸餾水和0.5mL絲膠蛋白溶液配成濃度為0.75mg/mL的溶液。

（3）用移液管分別取1mL蒸餾水和1mL絲膠蛋白溶液配成濃度為0.5mg/mL的溶液。

（4）取0.5mg/mL的溶液1mL，再加入1mL的蒸餾水將其稀釋1倍，此時濃度為0.25mg/mL。

（5）取0.25mg/mL的溶液1mL，再加入1mL的蒸餾水將其稀釋1倍，此時濃度為0.125mg/mL。

最后測出不同濃度下絲膠蛋白溶液的吸光度值。將儀器參數先設置好，首先測量一下基線，然后分別測5個濃度溶液的吸光度，做出絲膠蛋白標準曲線。

2.吸附絲膠蛋白的離子液體金屬配合物用量工藝條件

先取5份3mL濃度為0.25%的絲膠蛋白溶液于5個小管內，然后用電子天平準確稱量固體（離子液體金屬配合物），分別稱取的固體質量為0.02g、0.04g、0.06g、0.08g、0.1g；再將上述稱量好的固體依次加入裝有絲膠蛋白溶液的小管內，做好標記，放入離心泵中離心3min，用移液管分別從上述5個管內取出2mL加入到離心管，備用；調節好基線后，分別測出上述5個不同溶液的光譜，觀察其吸光度值的變化。

3.吸附絲膠蛋白的吸附時間工藝條件

取5份3mL濃度為0.25mg/mL的絲膠蛋白溶液于5個小管內，用電子天平準確稱量離子液體鐵配合物0.08g，依次加入上述5個管內；然后將第一個小管均勻搖晃5s后離心2min，用移液管取其上層清液2mL，并測量其吸光度A1，做好標記1；將測完吸光度的溶液倒回管內，繼續均勻搖晃25s（即固體與絲膠蛋白溶液的接觸時間為30s）后離心2min，用移液管取其上層清液2mL，并測量其吸光度A2，做好標記2；接著將上一步驟中測完吸光度的溶液倒回管內，繼續均勻搖晃30s（即固體與絲膠蛋白溶液的接觸時間為60s）后離心2min，用移液管取其上層清液2mL，并測量其吸光度A3，做好標記3；繼續將測完吸光度的溶液倒回管內，繼續均勻搖晃30s（即固體與絲膠蛋白溶液的接觸時間為90s）后離心2min，用移液管取其上層清液2mL，并測量其吸光度A4，做好標記4；最后將測完吸光度的溶液倒回管內，繼續均勻搖晃210s（即固體與絲膠蛋白溶液的接觸時間為300s）后離心2min，用移液管取其上層清液2mL，并測量其吸光度A5，做好標記5。

4.吸附絲膠蛋白的溫度工藝條件

首先配置好濃度為0.25mg/mL的絲膠蛋白溶液，用移液管取3mL于小管內，再用電子天平準確稱量離子液體鐵配合物質量0.08g于管內。將冰塊和水混合在大燒杯內，控制溫度為0℃，將小管放進去，均勻搖晃300s，再放入離心泵中離心3min，取其上層清液，并測量其吸光度A1；測量后再倒回管內，把上述中的小管放入水浴鍋中加熱到10℃，搖晃300s并離心3min，取其上層清液并測量其吸光度A2；再將水浴鍋加熱到20℃，將小管放進去，搖晃300s再離心3min，測其吸光度A3；繼續將水浴鍋加熱至40℃，重復上述步驟，測其吸光度為A4；接著把水浴鍋加熱到60℃，并重復上述的步驟，測其吸光度為A5；觀察5個溫度條件下吸光度的變化，并繪制曲線。

5.吸附絲膠蛋白的pH工藝條件

取濃度為0.25mg/mL的絲膠蛋白溶液3mL于小管內，稀釋鹽酸后取0.5mL加入到蛋白溶液中，用pH試紙測其pH至2，此時管內溶液體積為3.5mL，環境為酸性，測量其吸光度值A1；再取濃度為0.25mg/mL的絲膠蛋白溶液3mL于小管內，加入0.5mL的蒸餾水，此時管內溶液體積為3.5mL，環境為中性，測量其吸光度值A2；接著取濃度為0.25mg/mL的絲膠蛋白溶液3mL于小管內，稀釋NaOH后取0.5mL加入到蛋白溶液中，并用pH試紙測其pH至10，此時管內體積為3.5mL，環境為堿性，測量其吸光度值A3；最后將上述3個小管分別加入等量的固體0.08g，放入裝有60℃水的燒杯中，均勻搖晃300s，并放入離心泵中離心2min，測量此時3個溶液的吸光度值，并計算其在3個環境下的吸附率。

6.絲膠蛋白的解吸工藝條件

取濃度為0.5mg/mL的絲膠蛋白溶液于小管內，測其吸收光譜；加入0.08g固體，再加入0.5mL的蒸餾水，使其pH呈中性，在60℃的環境下振蕩300s，然后放入離心泵中離心2min后，取其上層清液并測量其吸收光譜；再將管內上層清液用移液管吸走，留固體于管內，此時向其加入0.1mol/L NaOH水溶液3mL進行解吸，再離心2min，取上層清液測量其吸收光譜。