必 備 知 識(shí)

一、實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)原則與總體要求

植物組織培養(yǎng)是一項(xiàng)技術(shù)性較強(qiáng)的工作。為了確保植物組織培養(yǎng)工作的順利進(jìn)行，在進(jìn)行植物組織培養(yǎng)之前，不論是以實(shí)驗(yàn)為目的還是以工廠化生產(chǎn)為目的，首先應(yīng)對(duì)工作中需要哪些最基本的設(shè)備條件有較為全面的了解，便于以后工作的開展。

（一）設(shè)計(jì)原則

（1）防止污染。控制住污染，就等于組織培養(yǎng)成功了一半。

（2）按照工藝流程科學(xué)設(shè)計(jì)，經(jīng)濟(jì)、實(shí)用和高效。

（3）結(jié)構(gòu)和布局合理，工作方便，節(jié)能、安全。

（4）規(guī)劃設(shè)計(jì)與工作目的、規(guī)模及當(dāng)?shù)貤l件等相適應(yīng)。

（二）總體要求

（1）實(shí)驗(yàn)室選址要求避開污染源，例如最好避免與溫室、微生物實(shí)驗(yàn)室、昆蟲實(shí)驗(yàn)室等相鄰。水電供應(yīng)充足，交通運(yùn)輸便利。

（2）保證實(shí)驗(yàn)室環(huán)境清潔。實(shí)驗(yàn)室潔凈，可從根本上有效控制污染。這是組織培養(yǎng)工作的最基本要求，否則會(huì)使植物組織培養(yǎng)工作遭受不同程度甚至是不可挽回的損失。因此，過道和設(shè)備防塵、外來空氣的過濾裝置等設(shè)計(jì)是必要的。

（3）實(shí)驗(yàn)室建造時(shí)，應(yīng)采用產(chǎn)生灰塵量最少的建筑材料；墻壁和天花板、地面的交界處宜做成弧形，便于日常清潔；管道要盡量暗裝，安排好暗敷管道的走向，便于日后的維修，并能確保在維修時(shí)不造成污染；洗手池、下水道的位置要適宜，不得對(duì)培養(yǎng)環(huán)境造成污染，下水道開口位置應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室的潔凈度影響最小，并有避免污染的措施；設(shè)置防止昆蟲、鳥類、鼠類等動(dòng)物進(jìn)入的設(shè)施。

（4）接種室、培養(yǎng)室的裝修材料還須經(jīng)得起消毒、清潔和沖洗，并設(shè)置能確保與其潔凈度相應(yīng)的控溫、控濕設(shè)施。

（5）實(shí)驗(yàn)室電源應(yīng)由專業(yè)部門設(shè)計(jì)、安裝并經(jīng)驗(yàn)證合格之后，方可使用。應(yīng)有備用電源，確保停電或掉電時(shí)能繼續(xù)操作。

（6）實(shí)驗(yàn)室必須滿足實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備（器皿的洗滌與存放、培養(yǎng)基制備和無菌操作、用具的滅菌）、無菌操作和控制培養(yǎng)三項(xiàng)基本工作的需要。

（7）實(shí)驗(yàn)室各分室的大小、比例要合理。一般要求培養(yǎng)室與其他分室（除馴化室外）的面積之比為3∶2；培養(yǎng)室的有效面積（即培養(yǎng)架所占面積，一般占培養(yǎng)室總面積的2/3）與生產(chǎn)規(guī)模相適應(yīng)。

（8）明確實(shí)驗(yàn)室的采光、控溫方式，應(yīng)與氣候條件相適應(yīng)。一般采用人工光照和恒溫控制，實(shí)驗(yàn)室為密封式或半地下式。

二、實(shí)驗(yàn)室的基本組成

實(shí)驗(yàn)室的基本組成如圖1-1所示。

G—藥品柜、儀器柜、器皿柜；T—實(shí)驗(yàn)臺(tái)；B—冰箱；H—烘箱；S—水槽；R—熱空氣消毒箱；

m—高壓滅菌器；Q—人工氣候箱；C—超凈工作臺(tái)；P—培養(yǎng)架子；K—空調(diào)

（一）基本實(shí)驗(yàn)室

基本實(shí)驗(yàn)室包括準(zhǔn)備室、滅菌室、緩沖間、無菌操作室、培養(yǎng)室，是組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)所必須具備的基本條件。如進(jìn)行工廠化生產(chǎn)，年產(chǎn)組培苗4萬(wàn)～20萬(wàn)，需3～4間實(shí)驗(yàn)用房，總面積60m²。

1．準(zhǔn)備室

（1）主要功能　用于玻璃器皿和實(shí)驗(yàn)用具的洗滌、干燥和貯存；培養(yǎng)材料的預(yù)處理與清洗；組培苗（也稱試管苗）的出瓶、清洗與整理，培養(yǎng)基的配制、植物材料的預(yù)處理等。

（2）設(shè)計(jì)要求　小型實(shí)驗(yàn)室面積一般為10～20m²。要求房間寬敞明亮、通風(fēng)、干燥、清潔衛(wèi)生，方便多人同時(shí)工作；有電源、自來水和水槽（池），上下水道暢通；地面耐濕、防滑、排水良好，便于清潔。

（3）儀器與用具配置　工作臺(tái)、烘箱、晾干架、周轉(zhuǎn)筐（塑料或鐵制）、各種規(guī)格的毛刷、藥品柜、電子分析天平、托盤天平、磁力攪拌器、蒸餾水器、酸度計(jì)、恒溫水浴鍋、電爐（或微波爐、電飯煲、液化氣爐灶等）、培養(yǎng)基灌裝機(jī)、普通冰箱、低溫冰箱（低于－20℃）等儀器設(shè)備；移液管（或微量移液器）、移液管架、培養(yǎng)瓶（包括試管）、棕色或透明試劑瓶、燒杯（帶刻度或不帶刻度）、量筒、容量瓶、培養(yǎng)皿、吸管、皮下注射器、打孔器、玻璃棒、標(biāo)簽紙、記號(hào)筆、耐高溫高壓塑料薄膜等封口材料、尼龍繩、脫脂棉、紗布、工作臺(tái)、蒸餾水桶、醫(yī)用小推車等用品和用具。此外，配備器械柜和藥品柜，分別存放接種用具和分類存放化學(xué)試劑。最好配備防塵設(shè)備，以減少灰塵污染。

2．滅菌室

（1）主要功能　用于培養(yǎng)基、器皿、工具和其他物品的消毒滅菌。

（2）設(shè)計(jì)要求　專用的小滅菌室面積一般為5～10m²。要求安全、通風(fēng)、明亮；墻壁和地面防潮、耐高溫；配備水源、水槽（池）、電源或煤氣加熱裝置和供排水設(shè)施；保證上下水道暢通，通風(fēng)措施良好。生產(chǎn)規(guī)模較小時(shí)，可與洗滌室、配制室合并在一起，但滅菌鍋的擺放位置要遠(yuǎn)離天平和冰箱，而且必須設(shè)置換氣窗或換氣扇，以利通風(fēng)換氣。

（3）儀器與用具配置　壓力滅菌鍋、干熱消毒柜或烘箱、細(xì)菌過濾裝置、工作臺(tái)、培養(yǎng)基存放架或櫥柜、周轉(zhuǎn)筐、換氣扇、醫(yī)用小推車等。

3．緩沖間

（1）主要功能　防止帶菌空氣直接進(jìn)入接種室和工作人員進(jìn)出接種室時(shí)帶進(jìn)雜菌。接種人員在緩沖間更衣、換鞋、洗手、戴上口罩后，才能進(jìn)入接種室。

（2）設(shè)計(jì)要求　面積不宜太大，一般在2～3m²。要求空間潔凈，墻壁光滑平整，地面平坦無縫，并在緩沖間和接種室之間用玻璃隔離，配置平滑門，以便于觀察、參觀和減少開關(guān)門時(shí)的空氣擾動(dòng)。空間安裝1～2盞紫外光燈，用以接種前的照射滅菌；配備電源、自來水和小洗手池，備有鞋架、拖鞋和衣帽掛鉤，分別用于接種前洗手、擺放拖鞋和懸掛已滅過菌的工作服。

（3）儀器與用具配置　紫外光燈、小洗手池、擱架、鞋架、衣帽鉤、拖鞋、工作服、實(shí)驗(yàn)帽和口罩等。

4．接種室

（1）主要功能　進(jìn)行植物材料的接種、培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)移等無菌操作，因此接種室也稱為無菌操作室。其無菌條件的好壞對(duì)組織培養(yǎng)的成功與否起著重要作用。

（2）設(shè)計(jì)要求　接種室不宜設(shè)在易受潮的地方。其大小根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要和環(huán)境控制的難易程度而定。在工作方便的前提下，宜小不宜大，小的接種室面積5～7m²即可。接種室要求密閉、干爽安靜、清潔明亮；塑鋼板或防菌漆的天花板、塑鋼板或白瓷磚的墻面光滑平整，不易積染灰塵；水磨石或水泥地面平坦無縫，便于清洗和滅菌。配備電源和平滑門窗，要求門窗密封性好；在適當(dāng)?shù)奈恢玫跹b紫外光燈，保持環(huán)境無菌或低密度有菌狀態(tài)；安置空調(diào)機(jī)，實(shí)現(xiàn)人工控溫，這樣可以緊閉門窗，減少與外界空氣對(duì)流。接種室與培養(yǎng)室通過傳遞窗相通。最好進(jìn)出接種室的人流、物流分開。

（3）儀器與用具配置　超凈工作臺(tái)、空調(diào)機(jī)、解剖鏡、接種器具消毒器（或高溫焚化爐）、紫外光燈、酒精燈、廣口瓶、三角瓶、搪瓷盤、接種工具、手持噴霧器、工作臺(tái)、擱架、接種用的小平車、不銹鋼長(zhǎng)方形飯盒（盛放70%～75%酒精，用于浸泡接種工具）或醫(yī)院用消毒盒等。配置污物桶，以便存放接種過程中的丟棄物，須每天清洗更換。

5．培養(yǎng)室

（1）主要功能　培養(yǎng)離體材料。

（2）設(shè)計(jì)要求　培養(yǎng)室的設(shè)計(jì)應(yīng)從以下幾方面考慮。

① 培養(yǎng)室的大小可根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模和培養(yǎng)架的大小、數(shù)目及其他附屬設(shè)備而定。每個(gè)培養(yǎng)室不宜過大，面積10～20m²即可，以便于對(duì)條件的均勻控制。其設(shè)計(jì)以充分利用空間和節(jié)省能源為原則，最好設(shè)在向陽(yáng)面或在建筑的朝陽(yáng)面設(shè)計(jì)雙層玻璃墻，或加大窗戶，以利于接收更多的自然光線，窗的高度比培養(yǎng)架略高為宜。培養(yǎng)室外最好有緩沖間或走廊。

② 能夠控制光照和溫度。通常根據(jù)培養(yǎng)過程中是否需光，設(shè)計(jì)成光照培養(yǎng)室和暗培養(yǎng)室；材料的預(yù)培養(yǎng)、熱處理脫毒或細(xì)胞培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)等在光照培養(yǎng)箱或人工氣候箱內(nèi)進(jìn)行。采用光照時(shí)控器控制光照時(shí)間。

采用空調(diào)機(jī)調(diào)控培養(yǎng)室內(nèi)的溫度。培養(yǎng)室面積較小時(shí)，采用窗式或柜式的冷暖型空調(diào)；培養(yǎng)室面積較大時(shí)，最好采用中央空調(diào)，以保證培養(yǎng)間內(nèi)各部位溫度相對(duì)均衡。

③ 保持整潔，防止微生物感染。要求天花板、墻壁光滑平整、絕熱防火，最好用塑鋼板或瓷磚裝修；地面用水磨石或瓷磚鋪設(shè)，平坦無縫，方便室內(nèi)消毒，并有利于反光，提高室內(nèi)亮度。

④ 擺放培養(yǎng)架，以立體培養(yǎng)為主。培養(yǎng)架要求使用方便、節(jié)能、充分利用空間和安全可靠。一般設(shè)六層，高度2m，最下一層距地面0.2m，最上一層高1.7m，層間距為30cm，架寬0.6m，架長(zhǎng)以40W日光燈管的長(zhǎng)度來決定，每個(gè)培養(yǎng)架安裝2～3盞日光燈，多個(gè)培養(yǎng)架共用1個(gè)光照時(shí)控器。安裝日光燈時(shí)最好選用電子整流器，以降低能耗。架材最好用帶孔的新型角鋼條，可使擱板上下隨機(jī)移動(dòng)。

⑤ 能夠通風(fēng)、降濕、散熱。培養(yǎng)室的門窗密封性要好，有條件的可用玻璃磚代替窗戶，并安裝排氣扇，以備在濕度高、空調(diào)有故障時(shí)可以打開排氣扇通風(fēng)排氣、散熱。南方濕度高的地方可以考慮在培養(yǎng)室內(nèi)安裝除濕機(jī)。

⑥ 培養(yǎng)室外應(yīng)設(shè)有緩沖間或走廊。

⑦ 培養(yǎng)室內(nèi)用電量大，應(yīng)設(shè)置供電專線和配電設(shè)備，并且配電板置于培養(yǎng)室外，保證用電安全和方便控制。

此外，為適應(yīng)液體培養(yǎng)的需要，在培養(yǎng)室內(nèi)配備搖床和轉(zhuǎn)床等設(shè)備，但要注意在大型搖床下面應(yīng)有堅(jiān)實(shí)的底座固定，以免搖床移位或因振動(dòng)大而影響培養(yǎng)車間內(nèi)的其他靜止培養(yǎng)。

（3）儀器與用具配置　空調(diào)機(jī)、排氣扇、搖床、轉(zhuǎn)床、光照培養(yǎng)箱或人工氣候箱、除濕機(jī)、光照時(shí)控器、干濕溫度計(jì)、溫度自動(dòng)記錄儀及最高最低溫度記錄儀、培養(yǎng)架、日光燈、工作臺(tái)、配電盤等。

6．馴化棚室

（1）主要功能　進(jìn)行組培苗的馴化移栽。

（2）設(shè)計(jì)要求　組培苗的馴化移栽通常在溫室或塑料大棚內(nèi)進(jìn)行。其面積大小視生產(chǎn)規(guī)模而定。要求環(huán)境清潔無菌，具備控溫、保濕、遮陰、防蟲和采光良好等條件。

（3）儀器與用具配置　具備彌霧裝置、遮陽(yáng)網(wǎng)、暖氣或地?zé)峋€、移栽床（固定式或活動(dòng)式）等設(shè)施；塑料缽、花盆、穴盤等移栽容器；草炭、沙子等移栽基質(zhì)。

（二）輔助實(shí)驗(yàn)室

根據(jù)研究或生產(chǎn)的需要而配套設(shè)置的專門實(shí)驗(yàn)室，主要用于細(xì)胞學(xué)觀察和生理生化分析等。

1．細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室

功能：用于對(duì)培養(yǎng)物的觀察分析與培養(yǎng)物的計(jì)數(shù)，對(duì)培養(yǎng)材料進(jìn)行細(xì)胞學(xué)鑒定和研究，由制片室和顯微觀察室組成。制片是獲取顯微觀察數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)，應(yīng)配備有切片機(jī)、磨刀機(jī)、恒溫箱及樣品處理和切片染色的設(shè)備。應(yīng)有通風(fēng)柜和廢液處理設(shè)施。顯微觀察室主要有顯微鏡和圖像拍攝、處理設(shè)備。

要求：明亮、清潔、干燥，防止潮濕和灰塵污染。

設(shè)備：雙筒實(shí)體顯微鏡、顯微鏡、倒置顯微鏡等。

2．生化分析實(shí)驗(yàn)室

功能：以培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)物為主要目的的實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)建立相應(yīng)的分析化驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，隨時(shí)對(duì)培養(yǎng)物成分進(jìn)行取樣檢查。大型次生代謝物生產(chǎn)，還需有效分離實(shí)驗(yàn)室。

三、主要用具及儀器設(shè)備

（一）儀器設(shè)備

1．超凈工作臺(tái)

超凈工作臺(tái)原用于半導(dǎo)體元件與精密儀器儀表的生產(chǎn)，現(xiàn)已成為植物組織培養(yǎng)中最常用的無菌操作裝置。優(yōu)點(diǎn)是操作方便自如，比較舒適，工作效率高，準(zhǔn)備時(shí)間短。紫外滅菌20～30min即可操作，可進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間使用。在工廠化生產(chǎn)中，接種工作量很大，需要經(jīng)常、長(zhǎng)久地工作，超凈臺(tái)是很理想的設(shè)備。超凈工作臺(tái)功率在145～260W，裝有小型鼓風(fēng)機(jī)，使空氣穿過一個(gè)前置過濾器，在這里把大部分空氣塵埃先過濾掉，然后再使空氣穿過一個(gè)細(xì)致的高效過濾器，除去了大于0.3μm的塵埃、細(xì)菌和真菌孢子等，最后以較潔凈的氣流吹到工作臺(tái)面。超凈空氣的流速為每分鐘24～30m，這已足夠防止附近空氣襲擾而引起的污染，這樣的流速也不會(huì)妨礙采用酒精燈對(duì)器械等進(jìn)行灼燒消毒。在這樣的無菌條件下操作，就可以保證無菌材料在轉(zhuǎn)移接種過程中不受污染。超凈工作臺(tái)分水平式和垂直式兩種，又有單人、雙人、三人等類型。

2．無菌手套箱（接種箱）

接種箱可以自制也可購(gòu)買，前面有玻璃便于觀察，左右兩側(cè)各有一孔，孔內(nèi)有一手套袖，避免污染。兩側(cè)有拉門。在投資少的情況下，可以用接種箱來代替超凈工作臺(tái)。接種箱依靠密閉、藥劑熏蒸和紫外燈照射來保證內(nèi)部空間無菌。但操作活動(dòng)受限制，準(zhǔn)備時(shí)間長(zhǎng)，工作效率低。

3．空調(diào)機(jī)

接種室和培養(yǎng)室的室溫保證都需要空調(diào)機(jī)，空調(diào)機(jī)應(yīng)安置在室內(nèi)較高的位置，以便于排熱散涼。

4．除濕機(jī)和加濕器

培養(yǎng)室的相對(duì)濕度應(yīng)為70%～80%。濕度過高，易長(zhǎng)雜菌；濕度過低，培養(yǎng)器皿內(nèi)的培養(yǎng)基會(huì)失水變干，影響培養(yǎng)物的生長(zhǎng)。

5．恒溫箱

恒溫箱用于植物材料的培養(yǎng)，可以控制溫度、濕度及光照等。有條件的話，可選擇全自動(dòng)的人工氣候箱。

6．烘箱

烘箱用于干燥洗凈的玻璃器皿，也可用于干熱滅菌和測(cè)定干物重。用于干燥需保持80～100℃；進(jìn)行干熱滅菌需保持150℃，達(dá)1～3h；若測(cè)定干物重，則溫度應(yīng)控制在80℃，烘至完全干燥為止。

7．高壓滅菌鍋

高壓滅菌鍋是植物組織培養(yǎng)中最基本的設(shè)備之一，用于進(jìn)行培養(yǎng)基和器械用具的滅菌。小規(guī)模實(shí)驗(yàn)室可選用小型手提式高壓滅菌鍋。如果是連續(xù)的大規(guī)模生產(chǎn)，應(yīng)選用大型立式的或臥式的高壓滅菌鍋，通常以電作能源。

8．冰箱

冰箱分為普通冰箱和低溫冰箱。主要用于貯存母液，各種易變質(zhì)、易分解的化學(xué)藥品以及植物材料等。

9．電子分析天平和托盤天平

電子分析天平，用于稱取大量元素、微量元素、維生素、激素等微量藥品，精確度為0.0001g；托盤天平用于稱取用量較大的糖和瓊脂等，其精確度為0.1g。天平應(yīng)放置在干燥、不受震動(dòng)的天平操作臺(tái)上。

10．顯微鏡及解剖鏡

顯微鏡及解剖鏡種類較多，用于分離微莖尖可采用雙筒實(shí)體解剖鏡。雙筒解剖鏡在分離莖尖等較小組織時(shí)，便于觀察、操作，通常放大5～80倍。放大40倍以上的操作需要有相當(dāng)熟練的技術(shù)和較好的工具。為進(jìn)行操作，要有照明裝置。解剖鏡上帶有照相裝置，根據(jù)需要隨時(shí)對(duì)所需材料進(jìn)行攝影記錄。

11．水浴鍋

水浴鍋用于溶解難溶藥品和熔化瓊脂條。

12．搖床與轉(zhuǎn)床

搖床與轉(zhuǎn)床用于改善液體培養(yǎng)材料的通氣狀況及促進(jìn)酶解原生質(zhì)體的解離。一般在液體培養(yǎng)中轉(zhuǎn)速為每分鐘100次左右，在解離原生質(zhì)體時(shí)為每分鐘80次左右。

13．磁力攪拌器

磁力攪拌器用于加速攪拌難溶的物質(zhì)，如各種化學(xué)物質(zhì)、瓊脂粉等。磁力攪拌器還可加熱，使之更利于溶解。

14．電蒸餾水器

電蒸餾水器采用硬質(zhì)玻璃或金屬制成。蒸餾水用于配制母液或培養(yǎng)基，配制培養(yǎng)基可用自來水來代替，若實(shí)驗(yàn)要求嚴(yán)格的話，則須用蒸餾水。

15．酸度計(jì)

組織培養(yǎng)中培養(yǎng)基pH值的準(zhǔn)確度是十分重要的，應(yīng)當(dāng)使用酸度計(jì)；若無酸度計(jì)，也可使用pH試紙進(jìn)行粗測(cè)。

首次使用酸度計(jì)前，應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液調(diào)節(jié)定位，然后固定。測(cè)量pH值時(shí)，待測(cè)液必須充分?jǐn)嚢杈鶆颉Ｈ绻囵B(yǎng)基溫度過高，測(cè)量時(shí)要調(diào)整pH值計(jì)上的溫度鈕使之和培養(yǎng)基溫度相當(dāng)。注意保護(hù)好玻璃電極，用后電極應(yīng)用蒸餾水沖洗凈，蓋上電極帽。

16．離心機(jī)

離心機(jī)用于收集原生質(zhì)體，轉(zhuǎn)速要求較低。一般為1000～4000r/min即可。

17．培養(yǎng)基分裝器

將配制好的培養(yǎng)基分裝于試管，為了節(jié)省時(shí)間和避免浪費(fèi)，在工廠化組配車間，可用培養(yǎng)基分裝器進(jìn)行灌裝。

18．電爐等加熱設(shè)備

電爐等加熱設(shè)備用于固體培養(yǎng)基配置時(shí)溶解瓊脂，可選擇電爐、電磁爐、微波爐等。

（二）各類器材

1．培養(yǎng)器皿

在組織培養(yǎng)中配制培養(yǎng)基和進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)需用大量的玻璃器皿。其要求由堿性溶解度小的硬質(zhì)玻璃制成，以保證長(zhǎng)期貯存藥品及培養(yǎng)的效果；培養(yǎng)用的還要求透光度好，能耐高壓、高溫，能方便地放入培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料，根據(jù)培養(yǎng)的目的和要求，可以采用不同種類、規(guī)格的玻璃器皿。其中以試管、三角瓶、培養(yǎng)皿等使用較多。

最常使用的是三角瓶，規(guī)格有100mL、250mL、500mL等。一般使用100mL三角瓶，無論靜止或振蕩培養(yǎng)皆適用。其培養(yǎng)面積大，利于組織生長(zhǎng)，受光也比試管好，且瓶口較小，亦不易污染。

培養(yǎng)皿常用90mm、120mm直徑等規(guī)格，要求上、下能密切吻合。它在游離細(xì)胞、原生質(zhì)體、花粉等的靜置培養(yǎng)、看護(hù)培養(yǎng)，無菌種子的發(fā)芽，植物材料的分離等過程中都要用到。

試管常用18mm×180mm或20mm×200mm規(guī)格。可用于培養(yǎng)較高的試管苗，另外也不易污染。

培養(yǎng)器皿還可就地取材，采用一些代用品。工廠化生產(chǎn)可采用廣口的200mL罐頭瓶，加蓋半透明的塑料蓋，由于瓶口大，所以大量繁殖時(shí)操作方便、工作效率高，也減少了培養(yǎng)材料的損傷。但缺點(diǎn)是易引起污染。

目前，培養(yǎng)容器和制備培養(yǎng)基所用的玻璃器皿逐漸被塑料器皿所代替。塑料容器具有質(zhì)輕、透明、不易破碎、成本低等優(yōu)點(diǎn)。如培養(yǎng)容器多為平底方盒形，能一層層地疊摞起來，從而節(jié)省空間。這類塑料制品多是采用聚丙烯材料制成，能耐高溫，可進(jìn)行高壓滅菌。有些產(chǎn)品為一次性消耗品，不但可節(jié)省洗滌人工，還可節(jié)省時(shí)間，提高效率。一次性塑料容器或帶螺絲帽的玻璃瓶，無須另外配蓋，使用時(shí)比較方便。

瓶口封塞可用多種方法，但要具有一定的通氣性和密閉性，以防止培養(yǎng)基干燥和雜菌污染。以前封口常用棉塞，這種封口辦法夏季極易污染，且不易保持培養(yǎng)基的濕度。現(xiàn)在多采用聚丙烯塑料薄膜作為封口，以線繩結(jié)扎或橡皮圈箍扎。為了增加通氣性，可在里面襯一層硫酸紙或牛皮紙，經(jīng)濟(jì)方便，且通氣好。也可采用專用的封口膜。

2．分注器

小型操作時(shí)可采用燒杯直接分裝。大型實(shí)驗(yàn)室可采用醫(yī)用“下口杯”作為分裝工具，在“下口杯”的下口管上套一段軟膠管，加一個(gè)彈簧止水夾，使用時(shí)非常方便。更大規(guī)模或要求更高效率時(shí)，可考慮采用液體自動(dòng)定量灌注設(shè)備。

3．離心管

離心管用于離心收集原生質(zhì)體，一般用5mL、10mL規(guī)格。

4．刻度移液管

刻度移液管常用的有0.1mL、0.2mL、0.5mL、2mL、5mL、10mL，用于配制培養(yǎng)基時(shí)吸取不同種類的母液。應(yīng)多準(zhǔn)備幾支，分開使用。

5．細(xì)菌過濾器

培養(yǎng)基中有些生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)以及有機(jī)附加物，如吲哚乙酸、赤霉素等，在高溫條件下易被分解破壞，可用細(xì)菌過濾器除去不能采用濕熱滅菌法的液體中的細(xì)菌。一般采用0.22μm微孔濾膜進(jìn)行抽濾滅菌。包括濾頭、注射器或采用抽濾裝置（真空泵、吸濾瓶、濾氣玻璃管等）。

6．實(shí)驗(yàn)器皿

在組織培養(yǎng)中配制培養(yǎng)基、貯藏母液、材料的消毒等需要用到的各種化學(xué)實(shí)驗(yàn)玻璃器皿，包括100mL、250mL、500mL、1000mL的燒杯，10mL、100mL、1000mL的量筒，100mL、1000mL的試劑瓶（棕色）等。

（三）器械用具

1．鑷子類

常應(yīng)用醫(yī)療上的鑷子。根據(jù)操作需要有各種類型，若用100mL的三角瓶作為培養(yǎng)瓶，可用20cm長(zhǎng)的鑷子。鑷子過短，容易使手接觸瓶口，造成污染；鑷子太長(zhǎng)，使用起來不靈活。如在分離莖尖幼葉時(shí)，則用鐘表鑷子。

2．剪刀類

可采用醫(yī)療五官科用的中型剪刀，主要用于切斷莖段、葉片等；也可以用彎形剪刀，由于其頭部彎曲，可以深入到瓶口中進(jìn)行剪切。

3．解剖刀

切割較小材料和分離莖尖分生組織時(shí)，可用解剖刀。刀片要經(jīng)常調(diào)換，使之保持鋒利狀態(tài)，否則切割時(shí)會(huì)造成擠壓，引起周圍細(xì)胞組織大量死亡，影響培養(yǎng)效果。

4．解剖針

解剖針可深入到培養(yǎng)瓶中，轉(zhuǎn)移細(xì)胞或愈傷組織，也可用于分離微莖尖的幼葉。可以自制。

5．接種工具

接種工具包括接種針、接種鉤及接種鏟，由白金絲或鎳絲制成。

6．鉆孔器

鉆孔器常在取肉質(zhì)莖、塊莖、肉質(zhì)根內(nèi)部的組織時(shí)采用。一般為“T”字形，口徑有各種規(guī)格。

7．其他

其他包括酒精燈、電爐、試管架、搪瓷盤、玻璃棒等多種。

四、實(shí)驗(yàn)室的管理

（一）洗滌

1．器皿的清洗

植物組織培養(yǎng)中對(duì)各種培養(yǎng)器皿要求洗滌清潔，以防止帶入有毒物或影響培養(yǎng)效果的化學(xué)物質(zhì)或微生物等，對(duì)那些常用的玻璃器皿的清潔要求更為嚴(yán)格。清洗玻璃器皿用的洗滌劑主要有肥皂、洗潔精、洗衣粉和鉻酸洗滌劑（由重鉻酸鉀和濃硫酸混合而成）。新購(gòu)置的器皿，先用1%的稀鹽酸浸泡，后用肥皂水洗凈，清水沖洗，再用蒸餾水淋一遍。用過的器皿，先要除去其上的殘?jiān)儆迷嚬芩⒀乇谏舷滤?dòng)和旋轉(zhuǎn)刷洗。刷后用清水沖洗，再用肥皂水或洗滌劑洗凈，再用清水徹底沖洗干凈，最后用蒸餾水沖洗一遍，干后備用。已被污染的器皿則必須在高壓滅菌后，用肥皂水或洗滌劑洗凈，再用清水沖洗干凈后，用蒸餾水沖洗一遍，干后備用。洗好的瓶子應(yīng)該透明光亮，內(nèi)外壁水膜均勻，不掛水珠。

移液管之類的儀器，可用洗耳球和熱洗衣粉水吸洗，再放在水龍頭下流水徹底沖凈，垂直放置晾干后使用。

2．金屬用具的清洗

新購(gòu)置的金屬用具表面有一層油脂，需擦凈后再用肥皂水洗凈，清水沖洗干凈后，擦干備用。用過的金屬用具，清水沖洗干凈后，擦干備用即可。

（二）滅菌

滅菌是進(jìn)行植物組織培養(yǎng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，包括對(duì)植物材料、培養(yǎng)基、器皿器械、實(shí)驗(yàn)室等的滅菌。不同的滅菌對(duì)象所采用的滅菌方法也不同，可參見表1-1。

現(xiàn)介紹幾種常用的滅菌方法。

1．干熱滅菌

干熱滅菌是適用于玻璃器皿和金屬器械的滅菌方法，即利用烘箱或熱空氣消毒箱等加熱到160～180℃，1～3h殺死微生物的方法。但由于此方法滅菌時(shí)能源消耗大、時(shí)間長(zhǎng)，所以一般不常用。

2．濕熱滅菌

濕熱滅菌是植物組織培養(yǎng)中最常用的滅菌方法，即利用高壓滅菌鍋滅菌的方法，適用于培養(yǎng)基、玻璃器皿、金屬器械、布制品等的滅菌。通常滅菌溫度121℃，壓力108kPa，20～30min。

3．熏蒸滅菌

為了確保無菌室和培養(yǎng)室無菌，每年要進(jìn)行1～2次熏蒸滅菌。對(duì)無菌室可以直接熏蒸。對(duì)培養(yǎng)室進(jìn)行熏蒸時(shí)，須將培養(yǎng)物取出放置于無菌環(huán)境下，待熏蒸滅菌完成后用75%的酒精棉球擦拭培養(yǎng)瓶后方能將其放入培養(yǎng)室。具體方法是用甲醛和高錳酸鉀或乙二醇加熱熏蒸，用量一般是每立方米用甲醛2mL、高錳酸鉀1g或用乙二醇6mL。

（三）準(zhǔn)備室及滅菌室的管理

保證房間干燥、清潔衛(wèi)生，藥品管理要有專門的藥品柜，各種藥品要求合理擺放，最好建立入柜登記制度，做到同一藥品先入先出。各類器皿使用后要按照規(guī)范洗滌干凈后放入藥品柜存放。小型儀器使用后也要求清理干凈后入柜。

（四）無菌室及培養(yǎng)室的管理

無菌室及培養(yǎng)室要求清潔并無菌。可采用每年1～2次熏蒸滅菌及75%酒精擦拭地面及臺(tái)面的方式滅菌。