【導(dǎo)入案例】

1575年，有人在陽光下觀察到菲律賓紫檀木切片的黃色水溶液呈現(xiàn)極為可愛的天藍(lán)色。1852年斯托克斯（G.G.Stokes）用分光計(jì)觀察奎寧和葉綠素溶液時(shí)，發(fā)現(xiàn)它們所發(fā)出的光的波長比入射光的波長稍長，由此判明這種現(xiàn)象是由于這些物質(zhì)吸收了光能并重新發(fā)出不同波長的光線，斯托克斯稱這種光為熒光。人們可以將試樣與已知物質(zhì)同時(shí)放在紫外光源下，根據(jù)它們所發(fā)熒光的性質(zhì)、顏色和強(qiáng)度，鑒定它們是否含有同一物質(zhì)。也可用熒光分光光度計(jì)測(cè)量物質(zhì)在某一波長處的熒光強(qiáng)度，進(jìn)而計(jì)算出被測(cè)物的含量。例如將維生素B1在堿性溶液中被氰化鉀氧化成硫色素后，快速異丁醇振搖提取，在激發(fā)波長為365nm照射下記錄發(fā)射波長為435nm下的熒光強(qiáng)度，通過與對(duì)照品熒光強(qiáng)度比較可求出維生素B1的含量。

一些物質(zhì)被某種波長激發(fā)光照射后，能選擇性吸收特定波長的能量，并發(fā)射出比原吸收波長更長的光，這種現(xiàn)象為光致發(fā)光。當(dāng)激發(fā)光停止，所發(fā)射的光也立即消失，這種光稱為熒光（fluorescence）。根據(jù)激發(fā)光的波長范圍不同，可分為X射線熒光、紫外-可見熒光、紅外熒光等。根據(jù)發(fā)射熒光的粒子不同，可分為分子熒光、原子熒光。基于對(duì)物質(zhì)熒光的測(cè)定而建立起來的定性和定量分析方法稱為熒光分析法（fluorometry）或熒光分光光度法。本章主要介紹激發(fā)光源為紫外-可見的分子熒光分析法。

熒光分析法具有以下優(yōu)點(diǎn)：①靈敏度高，由于在黑背景下測(cè)定熒光發(fā)射強(qiáng)度，熒光分析法較吸收光度法靈敏度高出2～3個(gè)數(shù)量級(jí)，可達(dá)10-10～10-12g/mL；②選擇性強(qiáng)，光譜干擾少，可以通過選擇適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)和發(fā)射波長來實(shí)現(xiàn)選擇性測(cè)量的目的；③線性范圍寬，熒光分析法線性范圍為3～5個(gè)數(shù)量級(jí)，而吸收光度法線性范圍僅為1～2個(gè)數(shù)量級(jí)；④試樣用量小、操作方便，熒光分析法在藥學(xué)、生物化學(xué)、臨床、食品及環(huán)境等分析中具

有特殊的重要性，特別是聯(lián)用技術(shù)更擴(kuò)大了熒光分析法的應(yīng)用范圍。

熒光分析法的不足——不是所有吸光物質(zhì)都能產(chǎn)生熒光，因此其應(yīng)用也受到一定程度上的限制。