第四節(jié)　特殊雜質(zhì)檢查

藥物中存在的特殊雜質(zhì)是指該藥物在生產(chǎn)和貯存過程中，根據(jù)藥物的性質(zhì)及生產(chǎn)工藝條件的不同，有可能引入的雜質(zhì)，包括中間體、分解產(chǎn)物以及副產(chǎn)物等。特殊雜質(zhì)的檢查方法在《中國藥典》（2015年版）中列入該藥的檢查項下。特殊雜質(zhì)的種類因藥物的品種的不同而異，藥物中的特殊雜質(zhì)情況較為復(fù)雜，檢查方法各異，主要是利用藥物和雜質(zhì)在理化性質(zhì)和生理作用上的差異來制定適宜的檢查方法，一般分成四大類。

一、物理法

（1）顏色　某些藥物本身無色，但其分解產(chǎn)物有色，或在生產(chǎn)過程中引入了有色的雜質(zhì)，可通過檢查藥物溶液的顏色來對其有色雜質(zhì)進行限量檢查。如《中國藥典》2015年版中葡萄糖溶液的顏色檢查。

（2）氣味　藥物（特別是揮發(fā)性藥物）中存在的雜質(zhì)如具有特殊氣味，則可通過特殊氣味來判定該雜質(zhì)的存在。如乙醇中混入雜醇油，雜醇油具有異臭，檢查乙醇中的雜醇油，是將乙醇分次滴在無臭清潔的濾紙上，待乙醇自然揮散后，不應(yīng)殘留雜醇油的異臭。

（3）溶解性　某些藥物可溶于水、有機溶劑或酸、堿中而其所含有的雜質(zhì)不溶或其雜質(zhì)可溶于水、有機溶劑或酸、堿而藥物卻不溶于相應(yīng)的溶劑。可以利用藥物和雜質(zhì)溶解行為的差別來控制藥物中的雜質(zhì)。如《中國藥典》（2015年版）葡萄糖中糊精的檢查就是利用葡萄糖與糊精在乙醇中的溶解性的差異，通過進行“乙醇溶液澄清度”的檢查來實現(xiàn)的。

（4）物理常數(shù)——旋光性　某些藥物本身具有旋光性，在其生產(chǎn)過程中易引入光學(xué)異構(gòu)體雜質(zhì)，可以利用藥物與其相應(yīng)的光學(xué)異構(gòu)體雜質(zhì)之間旋光性質(zhì)的差異，通過測定旋光度或比旋度來控制雜質(zhì)的限量。如硫酸阿托品為消旋體，本身無旋光活性，而其雜質(zhì)莨菪堿為左旋體，《中國藥典》（2015年版）規(guī)定藥物溶液（50mg/ml）的旋光度不得過-0.4°，來控制莨菪堿的量。

二、化學(xué)法

利用藥物和雜質(zhì)在化學(xué)性質(zhì)上的差異進行特殊雜質(zhì)檢查，主要是選擇雜質(zhì)所特有的化學(xué)性質(zhì)及與一定試劑發(fā)生特定的化學(xué)反應(yīng)，來控制雜質(zhì)的存在。

（1）酸堿性　如果藥物中存在的雜質(zhì)本身具有酸性或堿性，可以利用藥物與雜質(zhì)在酸堿性質(zhì)方面的差異來檢查雜質(zhì)的存在。如硫酸阿托品中其他生物堿的檢查，由于其他生物堿（東莨菪堿、山莨菪堿和樟柳堿等）比阿托品的堿性弱，可以利用這種差異進行雜質(zhì)檢查。

（2）氧化還原性　某些藥物與雜質(zhì)之間在氧化性或還原性方面存在差異，可以利用這種差異檢查藥物中存在的雜質(zhì)。如鹽酸嗎啡中阿撲嗎啡的檢查。

（3）顏色反應(yīng)　利用藥物中存在的雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色來檢查藥物中是否混入雜質(zhì)，可以根據(jù)限量規(guī)定，要求其在一定反應(yīng)條件下不得有某種顏色產(chǎn)生，或在相同條件下與雜質(zhì)對照品所顯的顏色進行目視比色，應(yīng)符合規(guī)定。

三、光譜法

（1）紫外分光光度法　紫外分光光度法一般是通過檢查雜質(zhì)吸光度的方法來控制藥物中雜質(zhì)的限量。即配制一定濃度的藥物溶液，選擇在藥品無紫外吸收而雜質(zhì)有吸收的波長處測定吸光度，控制吸光度的值不得超過某一限值。如地蒽酚中二羥基蒽醌的檢查，二羥基蒽醌的氯仿溶液在432nm波長處有最大吸收，而地蒽酚在該波長處幾乎無吸收。

如果藥物和雜質(zhì)在一定波長范圍內(nèi)均有吸收，也可利用藥物在某兩個波長處的吸光度比值來檢查雜質(zhì)的限量。如苯丙醇中苯丙酮的雜質(zhì)檢查。

（2）紅外分光光度法　紅外分光光度法用于雜質(zhì)限量檢查時，通常用于多晶型藥物中低效或無效晶型的檢查。某些多晶型藥物由于晶型結(jié)構(gòu)不同，一些化學(xué)鍵的鍵長、鍵角等發(fā)生不同程度的變化，從而導(dǎo)致紅外光譜中某些特征峰的頻率、峰形和強度出現(xiàn)顯著差異。利用這些差異，可以檢查藥物中低效或無效的晶型雜質(zhì)。

四、色譜法

某些藥物與雜質(zhì)在吸附或分配性質(zhì)上存在差異，可以采用色譜法將其分離，同時也可以進行檢測，近年來在特殊雜質(zhì)的檢查中應(yīng)用廣泛，主要包括：薄層色譜法、高效液相色譜法和氣相色譜法。

1.薄層色譜法

薄層色譜法是一種常用的特殊雜質(zhì)檢查方法，具有靈敏度高、簡便快速、不需特殊設(shè)備的優(yōu)點。常用的檢查方法有以下幾種。

（1）靈敏度法（即在規(guī)定的試驗條件下不允許出現(xiàn)雜質(zhì)斑點），該法進行特殊雜質(zhì)限量檢查的原理是在規(guī)定的試驗條件下，用顯色劑對規(guī)定量的雜質(zhì)的檢測限來控制其限量。該法試驗條件影響較大，一般作為備選方法，在無其他合適的檢查方法的情況下才選擇此法。

（2）雜質(zhì)對照法（以一定濃度的待測雜質(zhì)溶液為對照品溶液），該法特點是需要被測雜質(zhì)對照品，適用于待測雜質(zhì)已經(jīng)確定，并且具備該雜質(zhì)的對照品。檢查時，取一定濃度已知雜質(zhì)的對照品溶液和供試品溶液，分別在同一薄層板上點樣，展開、定位后檢查，供試品所含該雜質(zhì)斑點，不得超過雜質(zhì)對照斑點的大小或比雜質(zhì)對照斑點顏色更深。

（3）選用藥物中可能存在的某些物質(zhì)作為雜質(zhì)對照品，本法適用于當(dāng)藥物中的雜質(zhì)未確認完全或待測雜質(zhì)不止一種時，可根據(jù)藥物合成工藝、化學(xué)性質(zhì)等判斷其可能含有的雜質(zhì)，并具備該雜質(zhì)的對照品的情況下進行特殊雜質(zhì)檢查。采用本法時應(yīng)注意雜質(zhì)斑點與對照品應(yīng)具有可比性。

（4）主成分自身對照法，本法適用于當(dāng)雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)難以確定，或無雜質(zhì)的對照品的情況下控制特殊雜質(zhì)的量。檢查時，將供試品根據(jù)規(guī)定稀釋到一定濃度作為雜質(zhì)對照品溶液，與供試品溶液分別于同一薄層板上點樣，展開后顯色，規(guī)定供試品溶液所顯雜質(zhì)斑點顏色不得比對照品溶液所顯主斑點顏色更深（或熒光強度）。

2.高效液相色譜法

高效液相色譜法分離效能高，應(yīng)用廣泛，不僅可以分離，而且可以通過準確地測定各組分的峰面積、峰高等來分析各組分的含量，在進行藥物含量測定的同時，還可進行雜質(zhì)檢查。現(xiàn)介紹以下幾種方法。

（1）主成分自身對照法，本法適用于雜質(zhì)峰面積與主成分峰面積相差懸殊的情況。檢查時，將供試品溶液稀釋成適宜濃度，作為對照溶液。分別取供試品溶液和對照溶液進樣，通過供試品溶液中各雜質(zhì)峰面積及其總和與對照溶液主成分峰面積比較，以檢查供試品中雜質(zhì)的量。如醋酸甲羥孕酮中的有關(guān)物質(zhì)檢查。

（2）內(nèi)標法加校正因子，測定供試品中某個雜質(zhì)含量或主成分含量時，按各品種項下規(guī)定，精密稱（量）取雜質(zhì)對照品和內(nèi)標物質(zhì)，分別配制成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子測定用的對照溶液。取一定量注入儀器，記錄色譜圖，測量對照品和內(nèi)標物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計算校正因子：

式中　AS——內(nèi)標物質(zhì)的峰面積或峰高；

AR——對照品的峰面積或峰高；

cS——內(nèi)標物質(zhì)的濃度；

cR——對照品的濃度。

再取各品種項下含有內(nèi)標物質(zhì)的供試品溶液注入儀器，記錄色譜圖，測量供試品中被測成分（或其雜質(zhì)）和內(nèi)標物質(zhì)的峰面積或峰高，采用校正因子的內(nèi)標法按下式計算雜質(zhì)的含量或主成分的含量：

式中　AX——供試品（或其雜質(zhì)）峰面積或峰高；

cX——供試品（或其雜質(zhì)）的濃度；

其他符號含義同上。

（3）外標法，測定供試品中某個雜質(zhì)含量或主成分的含量時，按各品種項下的規(guī)定，精密稱（量）取雜質(zhì)對照品和供試品，分別配成溶液，并精密取一定量，注入儀器，記錄色譜圖，測量對照品和供試品被測成分的峰面積或峰高，采用比較法按下式計算該雜質(zhì)的含量或主成分的含量：

式中各符號的含義同上。

（4）面積歸一化法，檢查時，取供試品溶液注入儀器，經(jīng)高效液相色譜法分離后，測定色譜圖上各雜質(zhì)及藥物的峰面積以及除溶劑峰以外的色譜峰總峰面積，計算藥物中各雜質(zhì)峰面積及其總和占總峰面積的百分率，不得超過規(guī)定的限量。

3.氣相色譜法

除藥物中殘留溶劑外，一些揮發(fā)性特殊雜質(zhì)也可以采用氣相色譜法檢查，檢查方法同高效液相色譜法相同。

如氨芐西林中N，N-二甲苯胺的檢查，取本品約1.0g，精密稱定，置具塞試管中，加1mol/L氫氧化鈉溶液5ml，精密加入內(nèi)標溶液（精密稱取萘適量，加環(huán)己烷溶解并稀釋制成每1ml中約含50μg的溶液）1ml，強烈振搖，靜置，取上層液作為供試品溶液；取N，N-二甲基苯胺50mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加鹽酸2ml和水20ml，振搖均勻后，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置250ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置具塞試管中，加1mol/L氫氧化鈉溶液5ml，精密加入內(nèi)標溶液1ml，強烈振搖，靜置，取上層液，作為對照品溶液，照氣相色譜法（通則0521）試驗，以硅酮（OV-17）為固定相，涂布濃度為3％；柱溫為120℃；N，N-二甲基苯胺峰與內(nèi)標峰間的分離度應(yīng)符合要求。精密量取供試品溶液與對照品溶液各2μl，分別注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，按內(nèi)標法以峰面積比值計算，N，N-二甲基苯胺的量不得過百萬分之20。